鎖陽多糖延緩衰老的作用及端粒酶調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、目的：本文研究鎖陽抗衰老作用的主要有效部位，對活性成分鎖陽多糖(CSP)從形態(tài)學(xué)、自由基、免疫等多個(gè)角度研究其抗衰老作用及端粒、端粒酶調(diào)控機(jī)制。實(shí)驗(yàn)通過比較鎖陽不同溶液提取物對D-半乳糖致衰小鼠的抗氧化、抗衰老作用，探討鎖陽抗衰老的有效部位和有效提取部位的主要有效成分；研究CSP提取精制工藝，為工業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)；研究CSP對衰老模型小鼠免疫功能的影響和對端粒酶活性的影響；CSP對衰老模型小鼠血液及腦組織細(xì)胞染色體末端端粒長度和小鼠骨髓

2、及睪丸組織端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(TERT) mRNA表達(dá)的影響，觀察其抗衰老免疫機(jī)制及端粒酶機(jī)制，為鎖陽多糖的保健作用和藥用價(jià)值的開發(fā)和利用提供依據(jù)。
　　 方法：⑴制備鎖陽水、無水乙醇、乙酸乙酯提取物混懸液，應(yīng)用HPLC法，苯酚-硫酸法測定不同提取物中所含的主要活性成分兒茶素、熊果酸和多糖。建立小鼠衰老模型，以鎖陽的不同提取液連續(xù)給藥56d，取血并測定其過氧化氫酶(CAT)、總抗氧化能力(TAOC)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX

3、)三項(xiàng)指標(biāo)。⑵昆明小鼠腹腔注射D-半乳糖500 mg·kg-1·d-1制作衰老模型，CSP低(20mg·kg-1)、中(40 mg·kg-1)、高(80 mg·kg-1) CSP治療，連續(xù)56天后，測定脾臟、胸腺臟器系數(shù)，應(yīng)用MTT法測定骨髓細(xì)胞增殖數(shù)，通過體內(nèi)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率觀察非特異性免疫功能。應(yīng)用Elisa法測定睪丸組織端粒酶的活性。⑶昆明小鼠D-半乳糖制作衰老模型，動(dòng)物分成正常組、模型組、CSP低、中、高劑量、

4、黃芪多糖(40 mg·kg-1)各組，連續(xù)灌胃給藥56 d后，應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR方法測定各組小鼠血細(xì)胞及腦組織端粒的相對長度，應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量RT-PCR法測定骨髓及睪丸組織TERT mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：①鎖陽水提物主要含多糖類成分，含65.64%，不含熊果酸，兒茶素含量也極低，為0.026%。衡量CSP的多糖得率和純度，選擇水提醇沉法提取鎖陽多糖，精制后CSP得率為1.24%，多糖含量93.2%，平均分子質(zhì)量1.

5、29×105。②鎖陽不同提取物均具有一定的抗氧化、抗衰老能力，其中水、醇提物作用最顯著。鎖陽水提物的CAT、GSH-PX、TAOC三個(gè)抗氧化指標(biāo)同模型組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，接近正常組水平。醇提物CAT、GSH-PX明顯高于模型組，對TAOC影響不明顯。酯提物只能提高GSH-PX，對另外兩個(gè)指標(biāo)影響很小。③較高劑量的CSP能夠提高衰老小鼠免疫功能。CSP高、中、低劑量骨髓細(xì)胞增殖數(shù)分別為(0.44±0.09)；(0.43±0.08)；(0

6、.39±0.10)，各組同衰老組(0.32±0.11)相比均有明顯差異(P<0.05)。高劑量CSP能夠顯著提高衰老小鼠體內(nèi)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率(P<0.01)和腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率(P<0.05)。中、高劑量CSP組小鼠睪丸組織端粒酶陽性率明顯增加。④高、中劑量CSP組血細(xì)胞相對端粒長度T/Sratio分別為(1.64±0.36)，(1.33±0.28)，同衰老組(1.01±0.13)相比，有極顯著性差異(P<0.01)，腦組織高、中、低劑量

7、CSP組分別為(3.34±0.58)，(2.30±0.75)，(1.55±0.58)，同衰老組(1.04±0.33)相比，有極顯著性差異(P<0.01)。⑤骨髓中相對TERT/GAPDH基因表達(dá)各給藥組均值均高于衰老模型組，但只有CSP高劑量組(1.0129±0.0106)顯著高于衰老模型組(1.0000±0.0021)(P<0.05)。在睪丸中低(1.0004±0.0002)、中(1.0006±0.0003)、高劑量CSP(1.000