辨析導(dǎo)致毒蛇排毒量、蛇毒組成及酶活性種內(nèi)變異的因素.pdf

1、蛇毒是毒蛇在進化過程中形成的用于捕食、消化獵物及防御天敵的武器。蛇毒由于復(fù)雜的組成常表現(xiàn)出較大的種內(nèi)差異。本文以舟山眼鏡蛇(Naja atra)、短尾蝮(Gloydius brevicaudus)和五步蛇(Deinagkistrodon acutus)為對象,分別檢測地理分布、年齡、性別、季節(jié)變化和排毒頻率對動物排毒量、蛇毒組成與酶活性的影響。研究以咬膜皿法測定毒蛇排毒量鮮重、干重、體積和干物質(zhì)含量,以一向電泳或雙向電泳檢測蛇毒組成,并

2、以蛇毒對專一性底物的降解能力作為酶活性的度量。主要研究結(jié)果如下:
　　 舟山眼鏡蛇不同地理種群間的排毒量、蛇毒組成及酶活性存在差異。基于酶活性的聚類分析顯示舟山眼鏡蛇中國大陸東部種群間的關(guān)系較近。舟山眼鏡蛇不同地理種群的蛇毒組成與種群間地理距離、遺傳距離和氣候因素不存在相關(guān)性,酶活性只與氣候因素存在顯著的相關(guān)性。蛇毒組成差異影響蛇毒與抗血清的作用效果,舟山眼鏡蛇不同種群蛇毒與抗血清之間的反應(yīng)模式基本相似,但存在細小的區(qū)別。同園實

3、驗影響舟山眼鏡蛇不同種群排毒量及酶活性,與野外指標相比,飼養(yǎng)期間動物排毒量鮮重、干重和體積的種群間差異消失,且三個指標的平均值有趨同趨勢,但干物質(zhì)含量始終不存在差異。主成份分析顯示,實驗過程中舟山眼鏡蛇5個地理種群蛇毒酶活性在二維坐標系中的相對位置無固定模式。盡管同種群相同組分含量在不同時期會存在差異,但蛇毒組成的種群間差異是恒定的,因此蛇毒組成具有進化穩(wěn)定性。
　　 蛇毒特征在個體發(fā)育過程中是不斷變化的。以體長(snout-v

4、ent length,SVL)作為動物年齡度量,發(fā)現(xiàn)短尾蝮和舟山眼鏡蛇排毒量鮮重、干重及體積與SVL呈顯著的指數(shù)增長關(guān)系,短尾蝮幼體蛇毒具有較高的干物質(zhì)含量,舟山眼鏡蛇蛇毒干物質(zhì)含量不存在年齡間差異。除L-氨基酸氧化酶及纖溶酶活性不存在年齡間差異外,短尾蝮蛇毒蛋白酶活性、5’核苷酸酶、堿性單磷酯酶及酰胺降解活性均存在差異。舟山眼鏡蛇蛇毒酶活性也都存在年齡間差異。短尾蝮幼體蛇毒組成條帶數(shù)明顯多于成體和亞成體,幼體特有～31.1—34.1

5、kDa條帶。雙向電泳檢測發(fā)現(xiàn)短尾蝮蛇毒組分主要分布在分子量為～8.0-100.0 kDa(pI～4.0—9.0)的區(qū)間內(nèi),酸性組分的含量明顯高于堿性組分。成體高分子組分斑點數(shù)及含量明顯少于幼體,低分子組分則多于幼體；幼體蛇毒堿性組分明顯少于成體。不同年齡舟山眼鏡蛇蛇毒組成條帶數(shù)基本相同,但部分條帶含量仍存在差異。此外,免疫中和作用也受到毒蛇年齡的影響。
　　 均一條件下獲得的五步蛇幼體排毒量鮮重和干重不存在兩性差異,蛇毒鮮重與體

6、重呈正相關(guān)。雄體具有較強的蛋白酶水解活性,但精氨酸酯酶、酰胺降解及纖維蛋白原凝集活性明顯小于雌體,兩性個體具有相似的磷酯酶A2和透明質(zhì)酸酶活性。非還原性電泳發(fā)現(xiàn)蛇毒組成不存在兩性差異,但個體間存在顯著差異,主要集中在～36.6—39.6 kDa條帶區(qū)。還原性電泳未發(fā)現(xiàn)性別間與個體間蛇毒組成的差異。這種個體間、兩性間差異是受遺傳因素影響的。
　　 在恒定的飼養(yǎng)條件下,舟山眼鏡蛇排毒量存在顯著的季節(jié)差異,夏季排毒量鮮重和干重相對較小

7、,春季排毒量容積較大,但干物質(zhì)含量相對較小。蛇毒酶活性存在顯著的季節(jié)間差異,冬季蛇毒蛋白酶水解活性普遍低于其它三個季節(jié),夏秋兩季具有較低的5’核苷酸酶、L-氨基酸氧化酶、堿性單磷脂酶和乙酰膽堿酯酶活性。舟山眼鏡蛇不同月份蛇毒與抗血清免疫反應(yīng)存在差異,各月份蛇毒組成不存在顯著的差異,僅表現(xiàn)為相同組分含量上的差異。
　　 以30分鐘為間隔連續(xù)提取的短尾蝮蛇毒鮮重、干重、體積和干物質(zhì)含量存在顯著的批次間差異,首次排毒量干重占總量的57