日本血吸蟲SEA和SMWA抗原免疫后小鼠PD-1-PDL的表達(dá).pdf

1、免疫系統(tǒng)的功能是免疫防御、免疫自穩(wěn)和免疫監(jiān)視。機(jī)體抵抗病原體感染的免疫機(jī)制包括非特異性免疫與特異性免疫，針對(duì)病原體感染產(chǎn)生免疫應(yīng)答的主要目的是清除病原體。免疫應(yīng)答包括抗原識(shí)別、免疫細(xì)胞的活化和分化、效應(yīng)分子（體液免疫）和效應(yīng)細(xì)胞（細(xì)胞免疫）對(duì)病原體的清除作用以及對(duì)免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。一般隨著病原體的清除后免疫應(yīng)答隨之結(jié)束。但病原體感染會(huì)對(duì)機(jī)體免疫功能產(chǎn)生多方面的影響：既刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，也可以使機(jī)體免疫功能降低，導(dǎo)致感染進(jìn)入慢性期。免疫

2、抑制主要表現(xiàn)為T細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體能力降低，體內(nèi)、外細(xì)胞免疫或遲發(fā)型超敏反應(yīng)減弱,特定的淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的減少和一定程度的功能抑制。 免疫抑制的形成與細(xì)胞間相互作用產(chǎn)生負(fù)性的傳遞信號(hào)有著密切的關(guān)系。這些信號(hào)限制、終止和/或減弱T細(xì)胞應(yīng)答，改變這些協(xié)同刺激因子的表達(dá)可以調(diào)控免疫的強(qiáng)度和方向。到目前為止已發(fā)現(xiàn)毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4（Cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4，CTLA-

3、4）、B/T淋巴細(xì)胞間抑制信號(hào)（B and T lymphocyte attenuator，BTLA）、程序性死亡-1（Programmed death 1，PD-1）等B7-CD28家族的蛋白分子以及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Regulatory T cells，Treg）和細(xì)胞因子（如白細(xì)胞介素-10）等與免疫負(fù)調(diào)節(jié)有關(guān)。它們發(fā)揮免疫自穩(wěn)的作用，避免過(guò)度免疫應(yīng)答形成病理?yè)p傷和自身免疫病。其中，PD-1是B7家族的第2個(gè)抑制性受體，其兩個(gè)配體分別

4、為PD-L1和PD-L2，PD-1與其配體結(jié)合以后向胞內(nèi)傳導(dǎo)負(fù)性信號(hào)，成為免疫抑制中的重要傳導(dǎo)通路。PD-L1和PD-L2的表達(dá)與細(xì)胞因子的分泌相關(guān)，其中Th1類的細(xì)胞因子如IFN-γ可顯著刺激PD-L1的表達(dá)上調(diào)，而Th2類的細(xì)胞因子如IL-4則使PD-L2表達(dá)上調(diào)。 寄生蟲感染可導(dǎo)致宿主的免疫功能受到抑制，例如弓形蟲的感染誘導(dǎo)CTLA-4的釋放；馬來(lái)絲蟲可抑制T細(xì)胞的增生；非洲錐蟲感染后小鼠體內(nèi)巨噬細(xì)胞抗原遞呈功能缺陷。近年

5、來(lái)在淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、HIV、HCV等病毒感染和幽門螺旋桿菌、墨西哥利什曼原蟲等細(xì)菌或原蟲感染的研究中發(fā)現(xiàn)，免疫抑制的形成與PD-1及其配體的高表達(dá)密切相關(guān)，在曼氏血吸蟲感染中也發(fā)現(xiàn)了PD-1及其配體的表達(dá)升高。日本血吸蟲感染亦會(huì)造成宿主的免疫功能抑制，其機(jī)制是否與PD-1以及配體有關(guān)則未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本文旨在觀察和探討日本血吸蟲不同期抗原免疫后PD-1及其配體PD-L1、PD-L2的表達(dá)，以及與相關(guān)細(xì)胞因子分泌之間的關(guān)系。

6、 分別用日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原（Soluble egg antigen，SEA）和可溶性雄蟲抗原（Soluble male worm antigen，SMWA）腹部皮下多點(diǎn)注射免疫BALB/c小鼠，劑量均為50μg/次，免疫4次，每次間隔1周。正常對(duì)照組用PBS代替抗原。末次免疫后4周收集脾細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)觀察小鼠脾淋巴細(xì)胞表面PD-1的表達(dá)及脾樹突狀細(xì)胞表面配體PD-L1和PD-L2的表達(dá)；將脾細(xì)胞在體外短暫培養(yǎng)后，5μg/ml

7、ConA刺激,收集上清，夾心ELISA法檢測(cè)細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4的表達(dá)。結(jié)果顯示，血吸蟲抗原免疫后淋巴細(xì)胞上PD-1的表達(dá)顯著增高，且蟲卵抗原免疫后的PD-1的表達(dá)高于雄蟲抗原免疫，差異具有顯著性；在樹突狀細(xì)胞上PD-L1和PD-L2的表達(dá)也較對(duì)照組顯著上升，蟲卵抗原免疫后的PD-L2的表達(dá)高于雄蟲抗原免疫，而雄蟲抗原免疫后的PD-L1的表達(dá)高于蟲卵抗原免疫，差異具有顯著性。ELISA檢測(cè)脾細(xì)胞培養(yǎng)上清發(fā)現(xiàn)，兩種抗原免疫后脾細(xì)胞

8、分泌的IFN-γ和IL-4均升高，其中雄蟲抗原免疫后IFN-γ的升高較IL-4更為明顯；而蟲卵抗原免疫后IL-4的分泌增加則較IFN-γ更明顯，說(shuō)明PD-L1的高表達(dá)與日本血吸蟲的雄蟲抗原免疫后產(chǎn)生的IFN-γ有關(guān)，而PD-L2的高表達(dá)則與日本血吸蟲的蟲卵抗原免疫后產(chǎn)生的IL-4有關(guān)。 本研究首次報(bào)道了日本血吸蟲抗原免疫促進(jìn)了PD-1及其配體的表達(dá)，而且雄蟲抗原免疫后脾樹突狀細(xì)胞PD-L1的表達(dá)與IFN-γ的分泌有關(guān)，而蟲卵抗原