熟地黃提取物對衰老小鼠行為學(xué)及大腦退行性病變的影響及機(jī)制.pdf

1、目的：衰老是機(jī)體各組織、器官功能隨年齡增長而發(fā)生的退行性變化，年齡相關(guān)的大腦退行性病變是大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)在生長、發(fā)育、成熟之后走向衰老過程中而表現(xiàn)的生物老化的正常生理現(xiàn)象，其最突出的臨床表現(xiàn)是記憶和學(xué)習(xí)能力下降。地黃是玄參科植物地黃的根部，主要用于補(bǔ)益腎陰，地黃及以其為主藥的方劑具有延緩衰老進(jìn)程的作用。在本實(shí)驗(yàn)中，我們以自然衰老小鼠為研究對象，通過分析熟地黃水提取物(Rehmannia glutinosa Libosch extract

2、s，RGE)對衰老小鼠的行為學(xué)，與衰老相關(guān)的大腦退行性病變及其分子病理機(jī)制的影響，研究RGE延緩衰老的生物學(xué)基礎(chǔ)。 方法：采用自然衰老小鼠為研究對象。研究：(1)應(yīng)用Morris水迷宮、曠場實(shí)驗(yàn)及避暗實(shí)驗(yàn)評價RGE對衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶能力變化的影響，應(yīng)用HE染色研究RGE對衰老小鼠腦海馬CA3區(qū)神經(jīng)元密度的影響，BrdU標(biāo)記(BrdU Labeling)檢測RGE對衰老小鼠腦齒狀回神經(jīng)細(xì)胞合成及分化的影響；(2)采用脫氧核糖核苷酸

3、末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法檢測小鼠腦組織細(xì)胞凋亡率，分光光度法檢測RGE對衰老小鼠腦組織Cu—ZnSOD、MDA表達(dá)水平的影響；(3)采用Southern Blot與端粒重復(fù)序列擴(kuò)增法檢測RGE對自然衰老小鼠的端粒片段長度和端粒酶活性影響；(4)應(yīng)用real—timePCR、western blot等技術(shù)研究RGE對衰老小鼠腦組織p53、p21waf1基因表達(dá)的影響。 結(jié)果：使用RGE喂養(yǎng)30日，(1)可明顯改善自然衰老小鼠

4、與年齡相關(guān)的行為學(xué)改變，提高老年小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，改善衰老引起的海馬CA3區(qū)神經(jīng)元密度降低，提高腦齒狀回細(xì)胞合成分化率；(2)改善自然衰老小鼠腦組織中細(xì)胞凋亡率；顯著增加自然衰老小鼠腦組織Cu—ZnSOD含量，且此作用與RGE濃度有呈正相關(guān)的趨勢；但對MDA的表達(dá)水平的影響不明顯；(3)顯著增強(qiáng)自然衰老小鼠腦組織端粒端粒酶活性，與老年對照組相比，RGE喂養(yǎng)的自然衰老小鼠腦組織端粒長度有顯著性變化；(4)抑制自然衰老小鼠p21waf1基因

5、轉(zhuǎn)錄，可能通過影響非依賴P53途徑的p21waf1基因表達(dá)發(fā)揮降低P21蛋白表達(dá)量的作用。 結(jié)論：衰老過程中與年齡相關(guān)的大腦退行性變化是主要與遺傳因素、氧化損傷、神經(jīng)細(xì)胞凋亡、免疫系統(tǒng)異常、腦組織缺血缺氧等因素關(guān)系密切。中醫(yī)認(rèn)為，與年齡相關(guān)的神經(jīng)退行性病變多屬中醫(yī)的“呆病”、“文癡”、“癡呆”、“健忘”等范疇，陰精盛衰與衰老的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，滋陰補(bǔ)腎是延緩衰老最重要的手段。地黃是重要的補(bǔ)益腎陰中藥，應(yīng)用熟地黃水提取物可明顯提高

6、老年小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，改善與年齡相關(guān)的大腦退行性變化，其發(fā)揮作用的生物學(xué)基礎(chǔ)可能在于通過提高自然衰老小鼠腦組織抗氧化劑Cu—ZnSOD含量，增強(qiáng)腦組織細(xì)胞端粒酶活性，提高了腦齒狀回細(xì)胞合成分化率，減輕衰老過程中氧化損傷引起的DNA損傷，進(jìn)而通過影響非依賴P53途徑的p21waf1基因表達(dá)，降低調(diào)控細(xì)胞周期的核心蛋白P21表達(dá)，改善自然衰老小鼠腦組織中細(xì)胞凋亡及衰老引起的海馬CA3區(qū)神經(jīng)元密度降低，提高老年小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，改善自然衰老小