熟地黃提取物對衰老小鼠行為學及大腦退行性病變的影響及機制.pdf

1、目的：衰老是機體各組織、器官功能隨年齡增長而發(fā)生的退行性變化，年齡相關的大腦退行性病變是大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)在生長、發(fā)育、成熟之后走向衰老過程中而表現(xiàn)的生物老化的正常生理現(xiàn)象，其最突出的臨床表現(xiàn)是記憶和學習能力下降。地黃是玄參科植物地黃的根部，主要用于補益腎陰，地黃及以其為主藥的方劑具有延緩衰老進程的作用。在本實驗中，我們以自然衰老小鼠為研究對象，通過分析熟地黃水提取物(Rehmannia glutinosa Libosch extract

2、s，RGE)對衰老小鼠的行為學，與衰老相關的大腦退行性病變及其分子病理機制的影響，研究RGE延緩衰老的生物學基礎。 方法：采用自然衰老小鼠為研究對象。研究：(1)應用Morris水迷宮、曠場實驗及避暗實驗評價RGE對衰老小鼠學習記憶能力變化的影響，應用HE染色研究RGE對衰老小鼠腦海馬CA3區(qū)神經(jīng)元密度的影響，BrdU標記(BrdU Labeling)檢測RGE對衰老小鼠腦齒狀回神經(jīng)細胞合成及分化的影響；(2)采用脫氧核糖核苷酸

3、末端轉移酶介導的缺口末端標記法檢測小鼠腦組織細胞凋亡率，分光光度法檢測RGE對衰老小鼠腦組織Cu—ZnSOD、MDA表達水平的影響；(3)采用Southern Blot與端粒重復序列擴增法檢測RGE對自然衰老小鼠的端粒片段長度和端粒酶活性影響；(4)應用real—timePCR、western blot等技術研究RGE對衰老小鼠腦組織p53、p21waf1基因表達的影響。 結果：使用RGE喂養(yǎng)30日，(1)可明顯改善自然衰老小鼠

4、與年齡相關的行為學改變，提高老年小鼠學習記憶能力，改善衰老引起的海馬CA3區(qū)神經(jīng)元密度降低，提高腦齒狀回細胞合成分化率；(2)改善自然衰老小鼠腦組織中細胞凋亡率；顯著增加自然衰老小鼠腦組織Cu—ZnSOD含量，且此作用與RGE濃度有呈正相關的趨勢；但對MDA的表達水平的影響不明顯；(3)顯著增強自然衰老小鼠腦組織端粒端粒酶活性，與老年對照組相比，RGE喂養(yǎng)的自然衰老小鼠腦組織端粒長度有顯著性變化；(4)抑制自然衰老小鼠p21waf1基因

5、轉錄，可能通過影響非依賴P53途徑的p21waf1基因表達發(fā)揮降低P21蛋白表達量的作用。 結論：衰老過程中與年齡相關的大腦退行性變化是主要與遺傳因素、氧化損傷、神經(jīng)細胞凋亡、免疫系統(tǒng)異常、腦組織缺血缺氧等因素關系密切。中醫(yī)認為，與年齡相關的神經(jīng)退行性病變多屬中醫(yī)的“呆病”、“文癡”、“癡呆”、“健忘”等范疇，陰精盛衰與衰老的發(fā)生發(fā)展密切相關，滋陰補腎是延緩衰老最重要的手段。地黃是重要的補益腎陰中藥，應用熟地黃水提取物可明顯提高

6、老年小鼠學習記憶能力，改善與年齡相關的大腦退行性變化，其發(fā)揮作用的生物學基礎可能在于通過提高自然衰老小鼠腦組織抗氧化劑Cu—ZnSOD含量，增強腦組織細胞端粒酶活性，提高了腦齒狀回細胞合成分化率，減輕衰老過程中氧化損傷引起的DNA損傷，進而通過影響非依賴P53途徑的p21waf1基因表達，降低調控細胞周期的核心蛋白P21表達，改善自然衰老小鼠腦組織中細胞凋亡及衰老引起的海馬CA3區(qū)神經(jīng)元密度降低，提高老年小鼠學習記憶能力，改善自然衰老小