海風(fēng)藤提取物對(duì)AD模型大鼠行為學(xué)影響的研究.pdf

1、研究背景：阿爾茨海默病(Alzheimer disease， AD)是一種以進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙為主要表現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，其病理學(xué)特征是老年斑、神經(jīng)原纖維纏結(jié)及神經(jīng)元缺失。老年斑的主要成分是β淀粉樣蛋白(β-amyloid protein， Aβ)。雖然AD的確切病因及具體機(jī)制還不明確，但廣泛認(rèn)可的Aβ假說認(rèn)為，Aβ主要由β淀粉樣蛋白前體蛋白(Aβ precursor protein， APP)水解而產(chǎn)生，在機(jī)體內(nèi)因代謝障礙而沉積在

2、海馬、基底核等部位，從而啟動(dòng)了AD的發(fā)病過程，并在其發(fā)生、發(fā)展中起關(guān)鍵作用。許多研究認(rèn)為Aβ1-42寡聚體是AD發(fā)病中的主要毒性形式，其比聚合態(tài)Aβ1-42具有更高的神經(jīng)毒性。本病認(rèn)知缺陷的程度與腦內(nèi)寡聚體的水平相關(guān)，而不是與總的淀粉樣蛋白含量相關(guān)[1]。因此該實(shí)驗(yàn)同時(shí)使用Aβ1-42寡聚體和聚合態(tài)Aβ1-42來誘導(dǎo)大鼠的認(rèn)知功能障礙，并觀察兩者之間對(duì)大鼠行為學(xué)影響程度的不同。
　　 近些年來，已建立了多種較公認(rèn)的AD動(dòng)物模型，

3、然而現(xiàn)在還沒有一種動(dòng)物模型能夠模擬AD患者所有的認(rèn)知、行為、生化和組織病理學(xué)異常。使用微滲泵向側(cè)腦室內(nèi)持續(xù)灌注Aβ能夠部分模擬AD的病理表現(xiàn)，并且較好地解決了使大量Aβ彌散性分布到腦內(nèi)而不是在注射點(diǎn)局部聚集的問題，因而本實(shí)驗(yàn)采用側(cè)腦室持續(xù)灌注Aβ1-42方法建立AD研究的動(dòng)物模型。
　　 海風(fēng)藤屬胡椒科胡椒屬植物，具有神經(jīng)保護(hù)和抗炎作用。很多文獻(xiàn)報(bào)道側(cè)腦室持續(xù)灌注Aβ后可以導(dǎo)致大鼠行為學(xué)改變，但海風(fēng)藤能否減輕這些改變尚不清楚，因

4、此將研究海風(fēng)藤是否能改善模型大鼠學(xué)習(xí)記憶功能作為本課題的立項(xiàng)出發(fā)點(diǎn)。通過側(cè)腦室持續(xù)灌注Aβ1-42建立癡呆大鼠模型，采用水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察模型大鼠行為學(xué)改變以及海風(fēng)藤對(duì)其影響，為闡明AD發(fā)生機(jī)制及尋找干預(yù)措施提供依據(jù)，具有重要的理論意義和潛在的實(shí)用價(jià)值。
　　 目的：探討采用側(cè)腦室持續(xù)灌注Aβ1-42方法致SD大鼠AD模型的建立；探討Aβ1-42寡聚體與聚合態(tài)Aβ1-42對(duì)大鼠行為學(xué)不同程度的影響；探討應(yīng)用海風(fēng)藤干預(yù)后大鼠行為學(xué)是否

5、發(fā)生變化。
　　 方法：60只SD大鼠隨機(jī)分為10組，采用微滲泵向左側(cè)側(cè)腦室持續(xù)灌注法制作動(dòng)物模型。10組分別為：空白對(duì)照組（A組，不給于任何手術(shù)操作和干預(yù)）、假手術(shù)組（B組，只接受腦室內(nèi)置管等手術(shù)操作，不給于藥物）、聚合態(tài)Aβ組(C組，腦室內(nèi)灌注聚合態(tài)Aβ+乙腈和三氟乙酸造模)、聚合態(tài)Aβ+海風(fēng)藤提取物組（D組，腦室內(nèi)灌注聚合態(tài)Aβ+乙腈和三氟乙酸）、聚合態(tài)Aβ+DMSO組（E組，腦室內(nèi)灌注聚合態(tài)Aβ+乙腈和三氟乙酸）、乙腈和

6、三氟乙酸組（F組，腦室內(nèi)灌注乙腈和三氟乙酸，而不注射Aβ）、Aβ寡聚體組（G組，腦室內(nèi)灌注Aβ寡聚體+HDL和HEPES造模）、Aβ寡聚體+海風(fēng)藤提取物組(H組，腦室內(nèi)灌注Aβ寡聚體+HDL和HEPES)、Aβ寡聚體+DMSO組(I組，腦室內(nèi)灌注Aβ寡聚體+HDL和HEPES)、HDL和HEPES組（J組，腦室內(nèi)灌注HDL和HEPES，而不注射Aβ寡聚體）。術(shù)后D組和H組大鼠每天腹腔注射10％海風(fēng)藤提取物(含2.5％DMSO)，每100

7、g體重1ml，E組和I組大鼠每天腹腔注射2.5％DMSO，共5周。術(shù)后第31天起進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，分為空間探索期和定向航行期?？臻g探索實(shí)驗(yàn)時(shí)記錄逃避潛伏期，定向航行實(shí)驗(yàn)時(shí)錄制實(shí)時(shí)視頻，并分析計(jì)算穿越平臺(tái)的次數(shù)，在平臺(tái)所在象限經(jīng)歷的時(shí)間比率和路程比率。
　　 結(jié)果：(1)水迷宮實(shí)驗(yàn)空間探索期
　　 G組逃避潛伏期比C組延長(zhǎng)(P＜0.05)，C組潛伏期比F組延長(zhǎng)(P＜0.05)，G組潛伏期比J組延長(zhǎng)(P＜0.05)

8、：D組比C組、E組逃避潛伏期縮短(P＜0.05)；H組比G組、I組逃避潛伏期縮短(P＜0.05)；A組、B組、F組和J組之間逃避潛伏期無明顯差別。
　　 (2)水迷宮實(shí)驗(yàn)定向航行期
　　 G組穿越平臺(tái)的次數(shù)少于C組，時(shí)間比率和路程比率低于C組(P＜0.05)；C組穿越平臺(tái)的次數(shù)少于F組，時(shí)間比率和路徑比率低于F組(P＜0.05)；G組穿越平臺(tái)的次數(shù)少于J組，時(shí)間比率和路程比率低于J組(P＜0.05)；D組穿越平臺(tái)的次數(shù)多

9、于C組、E組，時(shí)間比率和路程比率高于C組、E組(P＜0.05)；H組穿越平臺(tái)的次數(shù)多于G組、I組，時(shí)間比率和路程比率高于G組、I組(P＜0.05)；A組、B組、F組和J組之間無明顯差別。
　　 結(jié)論：向一側(cè)側(cè)腦室持續(xù)灌注Aβ1-42能建立AD動(dòng)物模型；Aβ1-42寡聚體對(duì)大鼠行為學(xué)的影響較聚合態(tài)Aβ1-42對(duì)大鼠行為學(xué)的影響大；海風(fēng)藤干預(yù)能部分改善Aβ1-42組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。
　　 意義：本研究使用大腦立體定位技術(shù)