肌小節(jié)Z線蛋白Cypher泛素化降解的初步研究.pdf

1、細(xì)胞功能的完整性以及穩(wěn)態(tài)的維持都有賴于細(xì)胞內(nèi)蛋白合成和降解的平衡。由于心肌處于不斷的收縮舒張中，這種作用顯得尤為重要。心肌收縮的基本單位是肌小節(jié)(Sarcomeres)，肌小節(jié)蛋白正常的自我更新功能對維持其結(jié)構(gòu)和功能具有重要意義。肌小節(jié)Z線蛋白以及胞質(zhì)蛋白的過度積聚則會導(dǎo)致一些疾病的發(fā)生，如肌纖維性肌?。∕yofibrillar myopathy）。與其他器官組織類似，心肌肌小節(jié)蛋白的自我更新與泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(Ubiquitin-p

2、roteasome system)的功能密切相關(guān)。
　　泛素-蛋白酶體介導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解通路控制著真核細(xì)胞內(nèi)絕大多數(shù)蛋白質(zhì)的選擇性降解，主要由兩個過程組成，即蛋白的泛素化修飾以及泛素化修飾的蛋白被蛋白酶體識別并降解。該通路對于生命活動具有重要的調(diào)控意義。
　　Cypher是一個含有PDZ和LIM結(jié)構(gòu)域的蛋白，主要在橫紋肌中表達(dá)，對于維持肌小節(jié)正常的結(jié)構(gòu)和功能起重要作用。Cypher在心臟中特異性敲除可導(dǎo)致心功能的降低以及擴(kuò)張性

3、心肌病的發(fā)生。ZASP(Z-band alternatively Spliced PDZ-motif protein)基因，即Cypher在人的對應(yīng)基因，突變也可以導(dǎo)致人心肌肥大以及擴(kuò)張性心肌病的發(fā)生。
　　本課題旨在進(jìn)行肌小節(jié)Z線蛋白Cypher泛素化降解途徑的研究。首先利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與Cypher的ZM片段相互作用的泛素-蛋白酶體系統(tǒng)相關(guān)酶。通過成功構(gòu)建誘餌質(zhì)粒，文庫篩選，序列比對，發(fā)現(xiàn)ZM片段能夠與泛素化蛋白降解途徑

4、相關(guān)蛋白UBE2N(Ubiquitin-conjugating enzyme E2N)以及USP48（Ubiquitin specific peptidase48）相互作用。隨后在HEK293細(xì)胞內(nèi)，對USP48與Cypher在體外的相互作用作了驗證。實(shí)驗的第二部分，則研究了Cypher突變體對泛素化降解的影響，發(fā)現(xiàn)Cypher第四外顯子206位點(diǎn)的突變(T206I)可以導(dǎo)致Cypher降解增加，而這一過程可能是影響了泛素與Cypher