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文檔簡介
1、 RNA干擾技術(shù)(RNAi)能特異性抑制相應(yīng)基因序列的mRNA表達(dá)。本研究試圖研究小發(fā)夾RNA(shRNA)載體介導(dǎo)抑制人卵巢癌細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)基因的表達(dá)和對卵巢癌細(xì)胞增殖的影響。采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將抗VEGF小發(fā)夾狀雙鏈RNA真核基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到人卵巢癌細(xì)胞(HO-8910)中，用G418篩選獲得陽性克隆。用Westernblot、RT-PCR檢測VEGF基因在卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)；通過MTT及細(xì)胞周期分析觀察其
2、對卵巢癌細(xì)胞增殖的影響。研究結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染特異性小發(fā)夾RNA質(zhì)粒表達(dá)載體的HO-8910細(xì)胞中VEGF表達(dá)量明顯減少；細(xì)胞生長減慢，阻滯于G1期的增多，S期細(xì)胞減少。VEGF小發(fā)夾RNA質(zhì)粒載體可顯著抑制HO-8910細(xì)胞中的VEGF基因的表達(dá)，抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖。這為腫瘤的基因治療又探索出一條可行的治療途徑。另外構(gòu)建了大腸桿菌-雙歧桿菌穿梭表達(dá)載體，分別在兩種菌中了表達(dá)人內(nèi)皮抑素基因，為今后用雙歧桿菌作為生理菌載體進(jìn)行腫瘤的基因治療
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