BAX基因致人卵巢癌細(xì)胞凋亡的實驗研究.pdf

1、研究背景：
　　 卵巢癌嚴(yán)重威脅著廣大婦女的健康,起病隱匿,尚缺乏有效地預(yù)防和篩查手段,大多數(shù)患者就診時已屆晚期,盡管手術(shù)、放化療技術(shù)對該病的有效率已達(dá)70%,但大多數(shù)病人仍在短期內(nèi)復(fù)發(fā),5年存活率不到30%。基因治療是向腫瘤細(xì)胞引入抑癌基因或促進(jìn)凋亡基因,以糾正或補(bǔ)償基因缺陷從而達(dá)到治療目的,并使治療基因在腫瘤細(xì)胞內(nèi)暫時或永久表達(dá),導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡或壞死,從而達(dá)到殺傷或抑制腫瘤細(xì)胞生長的目的?；蛑委煹某绦虬ㄖ委熌康幕虻墨@

2、得、靶細(xì)胞的選擇與培養(yǎng)、載體的選擇、將目的基因?qū)氚屑?xì)胞、轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的選擇和鑒定以及基因治療的安全性監(jiān)測及療效評價等。
　　 Bcl-2基因即B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2基因,是一種原癌基因,它具有抑制凋亡的作用,目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一系列與Bcl-2同源的蛋白,構(gòu)成Bcl-2基因家族,按功能分為兩類,一類是像Bcl-2一樣具有抑制凋亡的作用,另一類是具有促進(jìn)凋亡的作用,其中以Bax研究最為廣泛,Bax具有強(qiáng)大的促進(jìn)細(xì)胞凋亡作用的基因,如果

3、能夠?qū)崿F(xiàn)腫瘤細(xì)胞Bax基因的高表達(dá),將促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。故推測應(yīng)用基因重組技術(shù)構(gòu)建Bax基因表達(dá)質(zhì)粒,并將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入卵巢癌細(xì)胞內(nèi)提高Bax基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
　　 研究目的：
　　 檢測Bax基因?qū)w外培養(yǎng)的人卵巢癌細(xì)胞系Ovcar3的促凋亡作用。
　　 研究方法：
　　 采用基因重組技術(shù)構(gòu)建Bax基因表達(dá)質(zhì)粒,經(jīng)DNA測序鑒定并證實其序列正確。并構(gòu)建Bax基因表達(dá)載體(PCDNA3-

4、Bax),將實驗分為空白對照組、PCDNA3組、PCDNA3-Bax組。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將2種載體轉(zhuǎn)染人卵巢癌細(xì)胞系Ovcar3。應(yīng)用蛋白印跡法(Westernblot)、反轉(zhuǎn)錄PCR、流式細(xì)胞術(shù)、MTT檢測轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中活性Caspase-3蛋白的表達(dá)情況、Bax基因表達(dá)水平、細(xì)胞的凋亡率、細(xì)胞存活率。
　　 研究結(jié)果：
　　 1、成功構(gòu)建表達(dá)Bax基因的載體PCDNA3-Bax。
　　 2、Bax基因促進(jìn)人