TREm-1在PLY致大鼠腦損傷模型中的動態(tài)水平變化及意義.pdf

1、背景和目的：
　　肺炎鏈球菌溶血素（pneumolysin，PLY）是由肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae，S.pn)溶解后釋放的主要毒力因子之一。PLY具有著多重的功能，可以破壞血腦屏障的細(xì)胞間緊密連接、引起細(xì)胞的自我溶解、刺激炎癥因子的釋放及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等，導(dǎo)致腦組織的嚴(yán)重?fù)p傷，與患兒的預(yù)后密切相關(guān)，在肺炎鏈球菌腦膜炎發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用。因此進(jìn)一步深入研究PLY導(dǎo)致腦損傷的機(jī)制，并采用相應(yīng)措施阻斷其

2、導(dǎo)致腦損傷的過程具有重要的意義。
　　髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體1（Triggering receptor expressed on myeloid cells-1 TREM-1）是最近發(fā)現(xiàn)的表達(dá)于中性粒細(xì)胞和單核/巨噬細(xì)胞表面的受體，作為感染性疾病中炎癥激發(fā)和級聯(lián)放大的關(guān)鍵物質(zhì)，它主要通過受體識別模式(TLRs)刺激炎癥因子的釋放（包括TNF-α、IL-6、IL-8等），進(jìn)而引起組織損傷，雖然其自然配體尚未發(fā)現(xiàn)，但在細(xì)菌和真菌感染中可發(fā)現(xiàn)

3、其表達(dá)增高。目前已有研究證實(shí)TREM-1在膿毒癥、肺炎、急性化膿性膽管炎等急性細(xì)菌感染性疾病中中性粒細(xì)胞、單核及巨噬細(xì)胞表面表達(dá)上調(diào)，但在神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病尤其是嬰幼兒細(xì)菌性腦膜炎中的研究報道不多。
　　為此本實(shí)驗(yàn)通過頸內(nèi)動脈注射PLY制作感染性腦損傷大鼠模型，并檢測TREM-1在PLY致腦損傷模型中不同時間點(diǎn)的表達(dá)水平，并與腦損傷的指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析，探討其在PLY在致腦損傷過程中的初步作用機(jī)制及意義。
　　材料與方法：<

4、br>　　將64只幼鼠隨機(jī)分為2組:肺炎球菌溶血素組（即PLY組，n=32），經(jīng)左側(cè)頸內(nèi)動脈注射0.1mL(8μg)PLY;生理鹽水對照組（即NS組，n=32），經(jīng)左側(cè)頸內(nèi)動脈注射等體積的生理鹽水。兩組按注射后不同時間點(diǎn)分為4h、6h、12h、24h4個亞組，平均每個亞組8只幼鼠。于預(yù)定時間點(diǎn)處死大鼠，制備腦組織勻漿液及石蠟切片標(biāo)本。免疫組織化學(xué)技術(shù)（SP法）測定腦內(nèi)皮層、海馬組織NSE、GFAP蛋白表達(dá)情況，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA

5、)檢測腦組織TREM-1、C1q、TNF-α、IL-6蛋白表達(dá)情況。所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，多組樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩樣本間相關(guān)性比較采用Pearson相關(guān)分析，顯著性水準(zhǔn)為α＜0.05。
　　結(jié)果：
　　1.形態(tài)學(xué)及行為學(xué)改變:肉眼觀PLY組大鼠左側(cè)眼球凹陷、壞死，眼瞼完全閉合，眼角處可見局部出血，體重減輕可達(dá)10％-15％。解剖學(xué)觀察左側(cè)腦體積較右側(cè)增大，腦組織腫脹，腦膜緊張，腦血管充血

6、明顯。HE染色光鏡下觀察PLY組新生血管形成，腦血管間隙增寬，神經(jīng)元細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞不同程度腫脹、空泡變性，NS組大鼠沒有上述變化。
　　2.PLY組TREM-1水平在4h達(dá)頂峰，6h仍較高，具有統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.05)，12h與24hTREM-1水平迅速下降，與NS對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異。C1q水平在6h達(dá)頂峰，12h仍較高，具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)，4h與24hC1q與NS對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異。TNF-α及IL-6水平

7、在各時間點(diǎn)均明顯高于對照組，并在24h組達(dá)到頂峰，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。TREM-1水平與C1q表達(dá)水平不具有相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r=0.052，P=0.778;TREM-1水平與TNF-α表達(dá)水平具有相關(guān)性。相關(guān)系數(shù)r=0.737，P＜0.05;TREM-1水平與IL-6表達(dá)水平具有相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r=0.659，P＜0.05。
　　3.TREM-1水平與GFAP表達(dá)水平具有相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r=0.570，P＜0.05