大鼠機械性腦損傷后腦干蛋白質(zhì)表達譜的變化及意義.pdf

1、目的：研究閉合性顱腦損傷大鼠腦干蛋白質(zhì)表達譜，探尋腦損傷生物標(biāo)志蛋白。 方法：選雄性SD大鼠隨機分為手術(shù)對照組及損傷后4h、8h、12h、24h和48h組，復(fù)制Marmarou's落體打擊大鼠腦損傷模型。分別進行神經(jīng)行為學(xué)評價、常規(guī)HE染色和尼氏染色；并用弱陽離子交換芯片(WCX2)和金屬親和吸附芯片(IMAC3)結(jié)合表面增強激光解析電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)分析大鼠閉合性腦損傷后不同時間腦干中蛋白質(zhì)表達譜的改變。 結(jié)果：

2、 1臨床表現(xiàn)： 損傷組大鼠于打擊后有84只大鼠(70％)出現(xiàn)抽搐同時有呼吸暫停，持續(xù)約15s；在沒有出現(xiàn)抽搐的大鼠中有11只大鼠(9.17％)出現(xiàn)驚厥，持續(xù)約30s；17大鼠(14.3％)傷后有肢體活動受限，表現(xiàn)為單肢或單側(cè)肢體活動受限。12只大鼠(10％)于打擊后出現(xiàn)持續(xù)呼吸抑制和全身抽搐，幾十秒鐘后呼吸停止，死亡。 2神經(jīng)行為學(xué)評價： 大鼠腦損傷后平衡能力、翻身、支頭、行走、逃避和四肢功能均較損傷前有所減

3、弱，評分降低。腦損傷后1h、12h大鼠行為學(xué)評分與損傷前相比有顯著性差異(P＜0.01)，損傷后24h、48h與損傷前比較無顯著性差異。 3大體病理學(xué)改變： 損傷組大鼠可見蛛網(wǎng)膜下腔出血，分布廣泛，無明顯大面積挫傷或局灶性挫裂傷；切面可見胼胝體點狀出血及雙側(cè)腦室出血。 4光鏡下觀察： 損傷組大鼠HE染色主要表現(xiàn)為額葉、項葉、枕葉、小腦及腦干蛛網(wǎng)膜下腔出血，側(cè)腦室出血，小挫傷灶。部分神經(jīng)細胞胞體濃縮，胞核固

4、縮，胞漿內(nèi)尼氏小體消失呈同質(zhì)性嗜酸性著色(紅色神經(jīng)細胞)；部分神經(jīng)細胞胞體腫脹，胞漿不規(guī)則淡染，核腫大淡染或消失。腦組織水腫，表現(xiàn)為腦組織疏松、神經(jīng)細胞及血管周圍間隙增大，腦干部分神經(jīng)纖維增粗、呈波浪狀改變。各損傷組腦干可見不同程度損傷，損傷后8h達到高峰。HE染色中所見的紅色神經(jīng)細胞，焦油紫染色呈深紫色；HE染色胞體腫脹，尼氏小體減少或消失的細胞，焦油紫染色整個細胞呈淡紫色。 5蛋白質(zhì)芯片檢測結(jié)果： (1)WCX-2芯

5、片共獲得495個腦干蛋白質(zhì)峰；IMAC-Cu芯片共獲得107個腦干蛋白質(zhì)峰。在6個組中，WCX-2芯片所捕獲的腦干蛋白質(zhì)數(shù)平均較IMAC-Cu芯片所獲得的高出362.6％。此外，IMAC-Cu芯片上捕獲的腦干蛋白質(zhì)總數(shù)中，6個(5.6％)的蛋白質(zhì)峰也出現(xiàn)在WCX-2芯片上。(2)腦干中檢測到的差異蛋白質(zhì)：在WCX-2芯片上，損傷后共有25個蛋白質(zhì)峰的相對強度與手術(shù)對照組相比有顯著性差異(P＜0.05)；另有53個蛋白質(zhì)峰在對照組未檢到。

6、在IMAC-Cu芯片上，損傷后共有2個蛋白質(zhì)峰的相對強度與手術(shù)對照組相比有顯著性差異(P＜0.05)，并發(fā)現(xiàn)12個蛋白質(zhì)在對照組未檢到。(3)差異蛋白質(zhì)的時序性變化：與手術(shù)對照組比較，損傷組中有統(tǒng)計學(xué)意義的27個蛋白質(zhì)峰和65個沒有出現(xiàn)在手術(shù)對照組的蛋白質(zhì)峰中，在損傷后各時間點均有分布，其中64個蛋白質(zhì)峰在損傷后12h以內(nèi)(包括12h)表達，27個蛋白質(zhì)峰在損傷12h后表達，1個蛋白質(zhì)峰在損傷后8-24h均有表達。在WCX-2芯片上有7

7、個蛋白質(zhì)峰在兩個以上時間點都可以檢測到，其中5131Da在損傷后4h、8h都可以檢測到；2466Da在損傷后8h、12h都可以檢測到；4445Da在損傷后8h、12h、24h都可以檢測到；2972Da在損傷后12h、24h都可以檢測到；8029Da、8248Da、11830Da在損傷后24h、48h都可以檢測到。在IMAC-Cu芯片上有1個蛋白質(zhì)峰在兩個以上時間點都可以檢測到，18383Da在損傷后4h、8h、12h都可以檢測到。(4)