大鼠機(jī)械性腦損傷動(dòng)態(tài)變化的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：建立體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞和大鼠創(chuàng)傷性腦損傷動(dòng)物模型，研究損傷后培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變和大鼠海馬蛋白質(zhì)組表達(dá)情況，尋找差異性生物標(biāo)志蛋白。 方法：選新生24小時(shí)內(nèi)SD大鼠，取海馬組織，培養(yǎng)10-14天后，隨機(jī)分為對(duì)照組及損傷后4h、8h、12h、24h和48h組，復(fù)制Scott's神經(jīng)細(xì)胞液壓沖擊損傷模型，進(jìn)行神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察。選成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為手術(shù)對(duì)照組及損傷后4h、8h、12h、24h和48h組，復(fù)制Marmaro

2、u's落體打擊大鼠腦損傷模型，采用雙向凝膠電泳技術(shù)分析大鼠閉合性腦損傷后不同時(shí)間海馬中蛋白質(zhì)組表達(dá)的改變。 結(jié)果：1體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞液壓沖擊損傷裝置穩(wěn)定性評(píng)價(jià)：通過(guò)記錄小室內(nèi)和有機(jī)玻璃管內(nèi)的壓力大小來(lái)檢測(cè)液壓沖擊損傷壓力的大小，結(jié)果表明，小室內(nèi)和有機(jī)管內(nèi)的壓力存在一線性關(guān)系(Y=4.4763X+0.2986，Y代表有機(jī)玻璃管內(nèi)壓力，X代表小室內(nèi)壓力)，造成細(xì)胞損傷力的大小以小室內(nèi)的壓力為準(zhǔn)。有機(jī)玻璃管和小室內(nèi)壓力隨鐘擺打擊角度的

3、增加而增大。輕(0.1MPa)、中(0.2MPa)和重度(0.3MPa)液壓沖擊損傷所需鐘擺下落角度分別為13.5°、21.5°和27°。2液壓沖擊損傷神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變：液壓沖擊后，神經(jīng)細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色，正常神經(jīng)細(xì)胞胞核呈藍(lán)色，胞漿染成淡藍(lán)色，損傷組培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞主要表現(xiàn)為部分神經(jīng)細(xì)胞胞體濃縮，胞核固縮，染色較深，呈深藍(lán)色，多為壞死型損傷細(xì)胞，甲苯胺藍(lán)染色，壞死型損傷細(xì)胞較正常細(xì)胞深染，各損傷組神經(jīng)細(xì)胞可見(jiàn)不同程度損傷，損傷后8h達(dá)高峰

4、，隨后逐漸恢復(fù)接近正常。 3蛋白質(zhì)雙向電泳結(jié)果：(1)在pH3-10膠條上，損傷后共有65個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)的相對(duì)強(qiáng)度與手術(shù)對(duì)照組相比有顯著性差異(P＜0.05)，有32個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷組未檢測(cè)到，7個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷組檢測(cè)到(2)在pH4-7膠條上，損傷后共有44個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)的相對(duì)強(qiáng)度與手術(shù)對(duì)照組相比有顯著性差異(P＜0.05)，有6個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷組未檢測(cè)到，17個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷組檢測(cè)到(3)在pH3-10膠條上，與手術(shù)對(duì)照組比較，

5、損傷組中有9個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在兩個(gè)或以上時(shí)間點(diǎn)未檢測(cè)到；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后8h、12h未檢測(cè)到；2個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后8h、48h未檢測(cè)到；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后24h、48h未檢測(cè)到；4個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在8h、12h、48h未檢測(cè)到；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在4h、8h、12h、24h、48h未檢測(cè)到；2個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在8h未檢測(cè)到；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在12h未檢測(cè)到；4個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在48h未檢測(cè)到。與手術(shù)對(duì)照組比較，損傷組中有1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在兩個(gè)或以上時(shí)間點(diǎn)可以檢測(cè)

6、到；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后8h、12h、24h、48h可以檢測(cè)到；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后8h可以檢測(cè)到；2個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后12h可以檢測(cè)到。(4)在pH4-7膠條上，與手術(shù)對(duì)照組比較，損傷組中有1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在兩個(gè)或以上時(shí)間點(diǎn)未檢測(cè)到；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后4h、12h、24h、48h未檢測(cè)到；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后8h未檢測(cè)到；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后48h未檢測(cè)到。與手術(shù)對(duì)照組比較，損傷組中有3個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在兩個(gè)或以上時(shí)間點(diǎn)可以檢測(cè)到；1

7、個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后24h、48h可以檢測(cè)到；2個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后12h、24h、48h可以檢測(cè)到；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后4h可以檢測(cè)到；3個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后8h可以檢測(cè)到；4個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后12h可以檢測(cè)到；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后48h可以檢測(cè)到。(5)在pH3-10膠條上，與手術(shù)對(duì)照組比較，損傷后共有34個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)增高；有31個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)降低；其中損傷組中有6個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在兩個(gè)或以上時(shí)間點(diǎn)表達(dá)增高；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后8h、

8、12h表達(dá)增高；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后8h、24h表達(dá)增高；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后12h、24h表達(dá)增高；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后24h、48h表達(dá)增高；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后4h、8h、12h表達(dá)增高；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后4h、8h、12h、24h、48h表達(dá)增高；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后4h表達(dá)增高；3個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后8h表達(dá)增高；11個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后12h表達(dá)增高；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后24h表達(dá)增高；2個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后48h表達(dá)

9、增高；其中損傷組中有5個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在兩個(gè)或以上時(shí)間點(diǎn)表達(dá)降低；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后8h、12h表達(dá)降低；2個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后12h、48h表達(dá)降低；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后4h、8h、24h表達(dá)降低；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后8h、12h、48h表達(dá)降低；13個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后8h表達(dá)降低；2個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后12h表達(dá)降低；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后24h表達(dá)降低；3個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后48h表達(dá)降低。(6)在pH4-7膠條上，與手術(shù)對(duì)照組比較，

10、損傷后共有36個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)增高；有8個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)降低；其中損傷組中有8個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在兩個(gè)或以上時(shí)間點(diǎn)表達(dá)增高；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后8h、12h表達(dá)增高；2個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后12h、24h表達(dá)增高；2個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后4h、8h、12h表達(dá)增高；2個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后12h、24h、48h表達(dá)增高；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在損傷后4h、8h、12h、24h、48h表達(dá)增高；2個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后8h表達(dá)增高；5個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后12h表達(dá)增高；1個(gè)

11、蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后24h表達(dá)增高；5個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后48h表達(dá)增高；其中1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后4h表達(dá)降低；4個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后12h表達(dá)降低；1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后24h表達(dá)降低；2個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在損傷后48h表達(dá)降低。 結(jié)論：1體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞液壓沖擊裝置可復(fù)制分級(jí)損傷模型，沖擊力定量準(zhǔn)確，重復(fù)性好，復(fù)制的模型可用于腦損傷的神經(jīng)病理和分子機(jī)制研究。 2腦損傷可引起海馬組織蛋白質(zhì)組發(fā)生變化。 3在海馬中各個(gè)