大鼠自體肺缺血再灌注損傷的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、研究背景：肺移植是治療終末期肺疾患的唯一方法，目前臨床應(yīng)用的肺保存技術(shù)所能提供的安全缺血時(shí)間有限，成為阻礙肺移植發(fā)展的關(guān)鍵因素。為進(jìn)一步改進(jìn)供肺保存方法，減輕肺移植后缺血再灌注損傷，國內(nèi)外進(jìn)行了大量的研究，以求延長供肺的保存時(shí)間。由于缺乏系統(tǒng)對(duì)供肺保存及缺血再灌注損傷的機(jī)理在蛋白質(zhì)水平的研究，目前對(duì)供肺保護(hù)的基因治療僅引入幾個(gè)無特異性的保護(hù)基因加以研究與驗(yàn)證。蛋白質(zhì)組學(xué)是以蛋白質(zhì)組為研究對(duì)象，從整體的角度，分析細(xì)胞內(nèi)動(dòng)態(tài)變化的蛋白質(zhì)組成

2、與活動(dòng)規(guī)律。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的進(jìn)步與提高，其已逐漸應(yīng)用到臨床疾病研究的各個(gè)領(lǐng)域。國內(nèi)外已開始對(duì)肺部疾病的蛋白質(zhì)組學(xué)研究，但應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在蛋白質(zhì)分子水平進(jìn)行供肺保存的缺血再灌注損傷機(jī)理研究尚未見報(bào)道。 目的：應(yīng)用比較蛋白質(zhì)學(xué)方法分析大鼠肺缺血再灌注肺組織與對(duì)照組肺組織的差異蛋白質(zhì)表達(dá)，在蛋白質(zhì)分子水平探討移植肺缺血再灌注損傷機(jī)理，為移植肺缺血再灌注損傷的預(yù)防和治療及供肺保存提供新的理論支持。 方法： (1)

3、本研究選用40只SD大鼠，隨機(jī)分為I/R組(實(shí)驗(yàn)組n=20)建立模擬自體左肺原位移植模型，在缺血再灌注后4小時(shí)獲取肺組織標(biāo)本及配對(duì)C組(正常對(duì)照組n=20)大鼠肺組織標(biāo)本，經(jīng)HE和VG染色后進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)比較研究并測(cè)定肺組織濕/干比值、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量； (2)在第一步的基礎(chǔ)上，進(jìn)行比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究：即利用固相pH梯度(IPG)雙向凝膠電泳(2-DE)分離出I／R組肺組織和C組肺

4、組織的總蛋白質(zhì)，然后應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(TOF-MS)分析及數(shù)據(jù)庫搜索對(duì)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行鑒定。 結(jié)論： (1)肺缺血再灌注損傷后肺組織發(fā)生能量代謝變化，即糖有氧代謝明顯降低，糖酵解增強(qiáng)。 (2)肺缺血再灌注損傷后早期，機(jī)體對(duì)肺組織脂質(zhì)過氧化反應(yīng)有一定的自身保護(hù)性調(diào)節(jié)機(jī)制，有重要應(yīng)激保護(hù)功能的蛋白質(zhì)超氧化物歧化酶和硒結(jié)合蛋白1(SBP-1)表達(dá)上調(diào)。 (3)鑒定出硒結(jié)合蛋白-1、胞液