缺血后處理對大鼠肺缺血再灌注損傷中SP-A、NO表達(dá)的影響.pdf

1、目的：迄今為止，肺缺血-再灌注損傷(LIRI)仍是胸心外科醫(yī)生面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。LIRI常發(fā)生在體外循環(huán)下心臟手術(shù)、肺移植或心肺聯(lián)合移植、肺栓塞及休克等多種臨床情況下, 尤其是肺移植過程中，嚴(yán)重時可以引起急性呼吸窘迫綜合癥、多器官功能障礙。缺血-再灌注導(dǎo)致的肺損傷的特點(diǎn)是非特異性的肺泡損傷、肺水腫和低氧血癥。肺移植后缺血-再灌注導(dǎo)致的移植肺損傷有較高的并發(fā)癥發(fā)生率和病死率，所以有必要更好的理解LIRI的機(jī)制，以及找到更有效的措施減輕再灌注

2、損傷。缺血后處理（I PostC ）是一種在再灌注初期間斷預(yù)灌注的新方法，在心肌和肝臟中已經(jīng)證明可以減輕缺血-再灌注損傷。本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上建立大鼠在體肺缺血-再灌注模型，應(yīng)用后處理干預(yù)，通過檢測肺組織中SP-A及NO表達(dá)水平探討后處理對它們的影響，分析后處理措施對肺缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：取健康雄性SD大鼠80只，30g/L 戊巴比妥鈉（30mg/kg）腹腔內(nèi)注射麻醉，氣管切開

3、后氣管插管連接TKP－200C 型小動物呼吸機(jī)控制呼吸，呼吸頻率60 次/min，吸呼比為1：1.5，工作壓力（即潮氣量）：0.02MPa。經(jīng)左胸第五肋間進(jìn)入胸腔，游離左側(cè)肺門，過阻斷帶，末端套橡膠管形成活結(jié)備阻斷用. 手術(shù)操作前經(jīng)陰莖背靜脈注射肝素鈉100U/kg 以維持肝素化.在再灌注期間,每隔1h由皮下注射生理鹽水1.5ml/kg 以補(bǔ)充水分的丟失.將動物隨機(jī)分成5 組，每組8 只——假手術(shù)組（C 組）：完成以上手術(shù)操作，但肺門不

4、阻斷；缺血－再灌注組（IR 組），又分為兩個時段，即缺血45min 后再灌注45min 組（IR45）和再灌注120min 組（IR120）；缺血后處理組（P 組），亦分成兩個時段，即缺血45min 后再灌注45min 組（P45）和再灌注120min 組（P120），本組在缺血45min 后，短暫再灌注1min，缺血1min，反復(fù)5次，然后全面恢復(fù)灌注。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死大鼠，切取新鮮左肺組織塊，用40g/L 多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切

5、片，用免疫組化法測定肺組織中SP-A及eNOS的表達(dá)水平；光鏡下HE染色觀察病理形態(tài)學(xué)改變。另將40只健康雄性SD大鼠按上述方法隨機(jī)分成5組，測定NO含量和NOS、iNOS活性。
　　 結(jié)果：⑴肺組織中SP-A表達(dá)水平的變化：以胞漿出現(xiàn)棕黃色為陽性染色，肺組織經(jīng)缺血-再灌注后，IR組與C組相比，SP-A的表達(dá)水平明顯下降（P＜0.01），且隨著時間的推移有下降趨勢；P組與相應(yīng)時段的IR組相比，表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01）。⑴

6、肺組織中eNOS表達(dá)水平的變化：以胞漿出現(xiàn)棕黃色為陽性染色，肺組織經(jīng)缺血-再灌注后，IR組與C組相比，eNOS的表達(dá)水平明顯下降（P＜0.01），且隨著時間的推移有下降趨勢；P組與相應(yīng)時段的IR 組相比，表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01）。⑶肺組織中NO含量和NOS、iNOS活性測定: 肺組織經(jīng)缺血－再灌注后,IR組與C組相比，肺組織中NO含量明顯升高(P＜0.01), NOS和iNOS活性明顯升高(P＜0.01),且它們都隨著時間的推移

7、有升高趨勢；P組與相應(yīng)時段的IR 組相比,肺組織中NO 含量明顯下降(P＜0.01), NOS和iNOS活性明顯下降(P＜0.01) 。⑷肺組織病理變化：C組：肺組織肺泡壁薄，結(jié)構(gòu)清晰，近似正常肺組織；IR組：肺泡間隔炎癥細(xì)胞浸潤、水腫，肺泡腔內(nèi)炎性細(xì)胞及液體滲出，肺泡結(jié)構(gòu)模糊，以上改變隨時間延長而加重；P組較之相應(yīng)時段的IR 組，上述變化均明顯減輕。
　　 結(jié)論：①I postC通過升高SP-A及eNOS的表達(dá)減輕LIRI。②