RFP-PLGA骨緩釋復(fù)合體的初步實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:①擬通過O/W乳化溶劑揮發(fā)法制備RFP-PLGA微球，以形態(tài)、粒徑分布、包封率和載藥量為指標(biāo)考察各處方因素的影響，并篩選出最優(yōu)工藝;②擬采用前期優(yōu)化處方制備緩釋微球，與骨支架結(jié)合，并觀察微球的骨填充情況及體外釋放行為;③采用新西蘭大白兔作為動(dòng)物模型，對(duì)RFP-PLGA骨緩釋復(fù)合體中RFP在體內(nèi)的分布及緩釋行為進(jìn)行了相關(guān)研究，同時(shí)考察了該復(fù)合物在體內(nèi)的相容性。為探討術(shù)后脊柱結(jié)核患者抗結(jié)核治療，減少其副作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方

2、法:①通過乳化-溶劑揮發(fā)法制備緩釋微球，以粒徑、載藥量、包封率為考察指標(biāo)對(duì)處方中的不同因素如PLGA濃度，表面活性劑的種類及濃度，油水比，藥載比進(jìn)行了單因素考察。并選取重要的影響因素進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)對(duì)處方進(jìn)一步優(yōu)化，得出各影響因素對(duì)制備過程影響強(qiáng)度，并篩選出最優(yōu)處方;②采用超聲振蕩法將RFP-PLGA緩釋微球灌入異體骨內(nèi)，再澆蓋一層殼聚糖溶液，真空干燥噴金后，用電子掃描顯微鏡和骨密度儀分別觀察RFP-PLGA緩釋復(fù)合體的填充狀態(tài)、外觀表面形

3、態(tài)及灌注前后骨密度的變化;體外釋放實(shí)驗(yàn)分成三組:A組RFP晶體、B組RFP緩釋微球及C組RFP-PLGA骨緩釋復(fù)合體，并采用透析袋法進(jìn)行體外釋放研究;③體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究分成A組RFP口服給藥組、B組RFP-PLGA骨緩釋復(fù)合體組、C組RFP晶體-骨復(fù)合體組，后兩組植入兔腰椎骨性缺損處，并通過大體觀察、影像學(xué)觀察、骨密度觀察、組織分布結(jié)果、生化指標(biāo)檢測(cè)、組織形態(tài)學(xué)觀察六個(gè)方面進(jìn)行對(duì)比。采用HPLC-UV法測(cè)定血漿及各組織中的藥物濃度。采用S

4、PSS17.0軟件包進(jìn)行分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差即(x)±S表示，采用多種統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法，如t檢驗(yàn)、方差分析及組間比較的SNK-q檢驗(yàn)、LSD-t檢驗(yàn)等，檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05，P值＜0.05為差異有顯著性意義。
　　結(jié)果:①通過單因素考察得知對(duì)考察指標(biāo)具有較大影響的處方因素，在此基礎(chǔ)上對(duì)處方進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果中各處方因素的影響強(qiáng)度如下:藥載比＞PVA濃度＞PLGA濃度＞油水比，并確定較優(yōu)工藝為:PLGA濃度15mg·ml-1、藥載比

5、1∶2、PVA濃度2％、油水比1:5;平行制得3批微球粒徑為12.23±0.98μ m;載藥量、包封產(chǎn)率分別為(19.63±0.62)％、(59.49±2.62)％，微球冷凍干燥后，再分散性及外觀良好;
　?、隗w外釋放顯示:A組RFP晶體在24 h內(nèi)釋放基本完全，B組RFP緩釋微球組及C組RFP-PLGA骨緩釋復(fù)合體組釋藥平緩，其中RFP緩釋微球組31d累計(jì)釋藥率達(dá)到近95％，釋放進(jìn)行動(dòng)力學(xué)方程擬合，顯示符合零級(jí)動(dòng)力學(xué)方程F=0.

6、168*t; RFP-PLGA骨緩釋復(fù)合體組約31d累計(jì)釋藥率達(dá)到近92.31％，未見無明顯的突釋，進(jìn)行動(dòng)力學(xué)方程擬合，顯示符合零級(jí)動(dòng)力學(xué)方程F=0.15*t;骨密度檢測(cè):三組灌注前后及B、C組骨密度無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);
　?、垠w內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明:A組即口服給藥組雖然在局部腰椎體組織中能維持較高的有效濃度，但其在肝、脾、心、肺等臟器中也存在較高的濃度;C組即RFP晶體-骨復(fù)合體植入組，盡管在維持靶組織有效濃度的同時(shí)減小藥物

7、在其他臟器中的分布，但維持時(shí)間甚短，15天后已低于最低檢測(cè)濃度;相對(duì)而言，B組RFP-PLGA骨緩釋復(fù)合體植入新西蘭大兔給藥后，3天時(shí)RFP濃度為11±0.7μg/ml-1，在7天時(shí)RFP濃度為13.3±0.4μg/ml-1，在15天時(shí)RFP濃度為8.5±1.6μ g/ml-1，在30天時(shí)RFP濃度為1.6±0.4μg/ml-1，在40天時(shí)RFP濃度為0.45±0.21μg/ml-1均明顯高于有效抑菌濃度，在體內(nèi)組織中緩慢下降，不僅其他

8、臟器中的藥物濃度低，而且40天時(shí)腰椎椎體RFP濃度仍可維持有效抑菌濃度，相對(duì)于C組在局部腰椎椎體組織中RFP的有效濃度持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng);骨密度檢測(cè):a.術(shù)后第7天:三組統(tǒng)計(jì)學(xué)比較分析:P＞0.05，無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;b.術(shù)后第30天:A組與B、C組比較:P＜0.05，有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;B組與C組比較:P＞0.05，無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;c.術(shù)后第7天與第30天不同組別比較:A7組與A30組比較:P＞0.05，無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B7組與B30組比

9、較:P＜0.05，有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C7組與C30組比較:P＜0.05，有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;肝毒性檢測(cè):三組給藥前后比較未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;RFP-PLGA骨緩釋復(fù)合體行內(nèi)植入腰椎骨性組織后，腰椎和腰大肌組織均未見明顯炎癥反應(yīng)，亦未見相關(guān)正常組織的破壞或形態(tài)異常。
　　結(jié)論:
　?、?、乳化一溶劑揮發(fā)法中諸多因素對(duì)微球成形和質(zhì)量具有明顯影響;2、篩選出最優(yōu)處方即PLGA濃度15mg· mL-1、PVA濃度2％、藥載比1:2及油