頜下腺細(xì)胞-絲素-殼聚糖復(fù)合體的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 探討絲素-殼聚糖(silk fibroin-chitosan,SFCS)為支架,接種頜下腺細(xì)胞后,于SD大鼠體內(nèi)構(gòu)建組織工程化頜下腺的可行性及生物學(xué)特征。
　　 方法：
　　 取1～3dSD大鼠頜下腺,原代培養(yǎng),傳代,將第二代細(xì)胞標(biāo)記5’-BrdU,制備成密度為5×106/ml的頜下腺細(xì)胞懸液。將其接種于5mm×5mm×5mm的絲素-殼聚糖支架上,體外培養(yǎng)1w。
　　 選取8w齡的SD大鼠3

2、6只,隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,每組18只。實(shí)驗(yàn)組將細(xì)胞-支架復(fù)合體植入鼠背部皮下；對(duì)照組將單純的SFCS支架植入鼠背部皮下。
　　 植入術(shù)后3、7、14d每組隨機(jī)處死6只SD大鼠,取材,大體觀察各組局部組織及全身變化。植入物石蠟包埋,組織學(xué)切片觀察絲素-殼聚糖中頜下腺細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況。BrdU免疫組織化學(xué)檢測(cè)細(xì)胞來(lái)源。CK8免疫組織化學(xué)檢測(cè)頜下腺細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)情況。掃描電子顯微鏡觀察頜下腺細(xì)胞與絲素-殼聚糖支架復(fù)合生長(zhǎng)的情況。應(yīng)用

3、圖像分析系統(tǒng)測(cè)定不同時(shí)期實(shí)驗(yàn)組CK8染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),采用SPSS forwindows 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行方差分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、大體觀察
　　 實(shí)驗(yàn)組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)植入物表面光滑、平整,有被膜覆蓋,周圍組織炎癥反應(yīng)較輕,隨著時(shí)間延長(zhǎng),表面有血管長(zhǎng)入,形狀始終與支架形狀一致,對(duì)照組可見(jiàn)大量纖維結(jié)締組織包裹材料,聚合物支架降解較實(shí)驗(yàn)組明顯。

4、>　　 2、組織學(xué)觀察
　　 實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞-支架復(fù)合物植入初期邊緣出現(xiàn)炎癥反應(yīng),中心區(qū)SFCS支架排列規(guī)整,頜下腺細(xì)胞數(shù)目較少,散在于SFCS支架中,分布均勻,無(wú)細(xì)胞外基質(zhì)分泌。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),炎癥反應(yīng)逐漸減輕,頜下腺細(xì)胞數(shù)目逐漸增多,細(xì)胞或吸附于材料表面,或分散在支架內(nèi),聚集成集落,呈島狀排列,分泌的粉染的細(xì)胞外基質(zhì)。
　　 3、免疫組織化學(xué)觀察
　　 各時(shí)間點(diǎn)BrdU免疫組織化學(xué)染色均存在陽(yáng)性細(xì)胞,CK8

5、免疫組織化學(xué)染色,實(shí)驗(yàn)組植入術(shù)后3d時(shí)陽(yáng)性細(xì)胞平均數(shù)為(29.53±9.37)/個(gè),7d時(shí)陽(yáng)性細(xì)胞平均數(shù)為(67.70±a:13.39)/個(gè),14d時(shí)陽(yáng)性細(xì)胞平均數(shù)為(139.07±47.27)/個(gè),比較三組數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),即隨著時(shí)間的延長(zhǎng),頜下腺細(xì)胞數(shù)目增多。對(duì)照組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)植入物中均未觀察到到CK8陽(yáng)性與BrdU陽(yáng)性細(xì)胞。
　　 4、掃描電子顯微鏡觀察
　　 SFCS支架呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),植入初期頜下