體外構(gòu)建抗結(jié)核性骨組織工程復(fù)合體的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　基于兔脂肪干細(xì)胞（rabbit adipose-derived stem cells, rADSCs）、利福噴丁聚乳酸緩釋微球、同種異體部分脫鈣骨支架，初步于體外構(gòu)建抗結(jié)核性骨組織工程復(fù)合體。
　　方法：
　　分離、培養(yǎng)rADSCs，經(jīng)檢測細(xì)胞周期、表面抗原CD44及分化誘導(dǎo)鑒定干細(xì)胞特性。用利福噴丁生長液干預(yù)rADSCs，按濃度分為0μg/ml、20μg/ml、40μg/ml及60μg/ml四組，分別繪制

2、細(xì)胞生長曲線、檢測細(xì)胞凋亡及堿性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）含量。制備利福噴丁微球，計(jì)算平均直徑、載藥率及包封率。構(gòu)建 rADSCs-利福噴丁微球二維復(fù)合物并成骨誘導(dǎo)。制備骨支架并構(gòu)建rADSCs-利福噴丁微球-骨支架三維復(fù)合物，計(jì)算細(xì)胞粘附率；掃描電子顯微鏡及蘇木精-伊紅（HE）染色觀察復(fù)合情況；每3d更換生長液，檢測體外釋藥特性。
　　結(jié)果：
　　rADSCs呈長梭形生長，G0/G1期占（

3、80.3±3.2）％，表面抗原CD44陽性表達(dá)。成骨誘導(dǎo)后ALP、茜素紅染色，成脂誘導(dǎo)后油紅O染色及成軟骨誘導(dǎo)后阿利新藍(lán)染色均為陽性。生長曲線示60μg/ml組第4～12 d增值能力較其他三組弱（P＜0.01）；凋亡檢測示60μg/mL組凋亡率高于其他三組（P＜0.01）；ALP檢測示第7、14 d60μg/ml組 ALP含量較其他三組少（P＜0.05）；臨界濃度為40μg/ml。微球平均直徑為（26.4±3.6）μm，載藥率為（40.

4、89±0.63）%，包封率為（75.24±0.18）%。二維復(fù)合物成骨誘導(dǎo)后茜素紅染色陽性。三維復(fù)合物細(xì)胞粘附率為（96.94±1.24）%；掃描電鏡及HE染色觀察復(fù)合體相容性良好；體外培養(yǎng)第3、6、39d累積釋藥量分別達(dá)總量的8.54%、20.12%及93.66%，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測的釋藥濃度均低于臨界濃度，但高于最低抑菌濃度。
　　結(jié)論：
　　體外構(gòu)建的抗結(jié)核性骨組織工程復(fù)合體具有持續(xù)緩慢釋放藥物的性質(zhì)，且該釋藥濃度不影響r