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文檔簡介
1、中山大學博士學位論文他汀類藥物抑制原發(fā)性肝癌生長的研究姓名:李曉軍申請學位級別:博士專業(yè):臨床醫(yī)學肝膽外科學指導教師:梁力建20060401中山大學博士學位論文成。蛋白水解酶中與腫瘤侵襲轉移關系最為密切的首推基質金屬蛋白酶( m a t r i x m e t a ] l o p r o t e i n a s e s ,M M P s ) 。腫瘤細胞、血管內皮細胞和基質成分的相互作用促成了腫瘤的生長、浸潤和轉移。S t a t i n
2、 s 的抗腫瘤作用涉及腫瘤發(fā)生發(fā)展的多個環(huán)節(jié),目前的研究多集中在體外實驗,尚缺乏對原發(fā)性肝癌的研究。本研究通過體內外實驗觀察S t a t i n s 對原發(fā)性肝癌的作用,并對其可能的機制作初步的探討。第一部分:普伐他汀對肝癌H e p G :細胞增殖的抑制作用目的臨床和實驗資料表明H M G —C o A 還原酶抑制劑( S t a t i n s ) 有抗腫瘤作用,我們用S t a t i n s 的代表藥物之一P r a v a
3、s t a t i n ( P r ) 來觀察這類藥物在體內外對肝細胞癌增殖和侵犯的作用并初步探討其可能的作用機制。方法將H e p G 2 肝癌細胞置于含1 0 %4 , 牛血清的R P M l l 6 4 0 培養(yǎng)液中,在3 7 。C 、5 %C 0 2 、飽和濕度的環(huán)境下培養(yǎng)。首先,將細胞傳入9 6 孔板,分成四組:A 組為對照組,僅加入含l O %d 、牛血清的R P M l l 6 4 0 培養(yǎng)液;B 、c 、D 組中除加入上
4、述培養(yǎng)基外,還分別按終濃度l m g /m l 、0 .1 m g /m l 和0 .O l m g /m l 的量加入P r 。用M T T比色試驗,連續(xù)觀察4 天,檢測肝癌細胞的增殖情況。將細胞傳入6 孔板中,培養(yǎng)7 2 h 后在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)變化。2 0 只裸小鼠每只左側頸背部皮下注射O .2 m l 細胞懸液,細胞數(shù)2 X 1 0 6 /只。5 天時1 7 只形成2 ~3 m m 的皮下結節(jié)。隨機分為兩組,P r 組
5、腹腔注射濃度為5 9 /L的P r O .2 m l ,對照組注射P B S 緩沖液,每天一次。每三天測量腫瘤長徑( a ) 和短徑( b ) ,按公式計算腫瘤體積:v = a ×b 2 /2 。成瘤后觀察三周,匯制腫瘤生長曲線。切除腫瘤,稱取腫瘤重量。抑瘤率= ( 對照組瘤重一實驗組瘤重) /對照組瘤重x 1 0 0 %。采用放免法測定動物血中A F P 水平。標本1 0 %中性福爾馬林固定,石蠟包埋,H E 染色鏡下常規(guī)病
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