活化的HLA半相合外周血干細(xì)胞治療晚期難治性實體瘤的基礎(chǔ)和臨床實驗研究.pdf

1、目的： 初步探討活化的HLA半相合外周血干細(xì)胞(haplo-PBSCs)在體內(nèi)外的抗腫瘤活性和作用機(jī)制，評價其治療晚期難治性實體瘤的安全性和可行性，并分析影響其治療效果的相關(guān)因素，以期為晚期難治性實體瘤患者提供一條新的安全的異體免疫治療途徑。 方法： 42例晚期轉(zhuǎn)移性/化療抵抗性實體瘤患者，采用PCR－SSP法檢測供受者之間的HLA配型情況，供者為與患者HLA配型半相合的健康直系親屬。供者經(jīng)10μkg·dG-CS

2、F動員3天后采集haplo-PBSCs，體外用大劑量rhIL－2培養(yǎng)4h后回輸給患者，觀察治療后患者的一般癥狀改善和影像學(xué)評價情況并隨訪；采用流式細(xì)胞儀檢測動員、活化前后的表型變化；采用半固體瓊脂糖法測定haplo-PBSCs活化前后粒單細(xì)胞集落形成能力的變化；用LDH法檢測大劑量rhIL－2短期活化前后haplo-PBSCs的非特異性殺瘤活性的變化；用ELISA法檢測患者回輸前后血清中Th1/Th2細(xì)胞因子的含量變化情況，從而全面評價

3、haplo-PBSCs在體內(nèi)外的抗腫瘤活性。并且按影響因素的情況分為不同亞組，分析比較不同亞組的總緩解率、臨床獲益率、總生存期、無進(jìn)展生存期、生活質(zhì)量總獲益率。 結(jié)果： 42例患者，提取供者基因組DNA的純度達(dá)(1.843±0.136)，濃度為(213.7±116)ng/ul。回輸?shù)幕罨疕LA半相合haplo-PBSCs總數(shù)為(3.39±0.51)×1010。經(jīng)G-CSF動員后采集的HLA半相合haplo-PBSCs與動

4、員前相比，T細(xì)胞尤其是CD4+T細(xì)胞比例顯著下降，而NK細(xì)胞比例顯著上升(P<0.05)；經(jīng)大劑量rhIL-2短期活化后，活化細(xì)胞(包括CD69+和CD25+細(xì)胞)亞群比例顯著升高(P<0.05)，而且其對多種細(xì)胞系的非特異性殺瘤活性顯著增強(qiáng)。治療一個療程后，患者外周血中CD4+、CD4+/CD8+、CD3-CD16+56+(NK)細(xì)胞比例較治療前均明顯升高(P<0.05)，而CD4+CD25+(Tregs)則明顯降低(P<0.05)；

5、外周血血清中Th1類細(xì)胞因子，如TNF-α、IFN-γ含量較治療前明顯升高(P<0.01)，而抑制細(xì)胞免疫功能的TGF-β含量明顯下降(P<0.05)。42例患者接受一個療程治療后，10例生活質(zhì)量改善，22例生活質(zhì)量穩(wěn)定，患者生活質(zhì)量總獲益率為76.2％，生活質(zhì)量評分(KPS)較治療前平均提高20分(0～30分)。臨床獲益率(CR+PR+SD)為73.8％(31例)，其中臨床達(dá)到PR的7例(包括腎癌、卵巢癌各2例，肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌各

6、1例)，無效11例。其中，腎癌和卵巢癌的臨床獲益率分別為90.0％和81.8％，相對于其他類腫瘤類型高，在治療反應(yīng)性和敏感性上可能占優(yōu)勢。全組患者的中位無進(jìn)展生存期(PFS)為6.0個月，其中腎癌組、卵巢癌組、肺癌組、乳腺癌組的中位無進(jìn)展生存期(PFS)分別為5.7、10.5、5.5、7.4個月。KIR不相合方向為GVH組在治療反應(yīng)性和生活質(zhì)量改善上較HVG(或相合)組具有一定的優(yōu)勢，兩組的總緩解率、臨床獲益率、總生存期、無進(jìn)展生存期、

7、生活質(zhì)量總獲益率分別為35.3％vs4.0％、94.1％vs60.0％、26.8±3.1vs17.4±3.0月、13.4±1.3vs8.0±0.9月、89.5％vs65.2％，P值均<0.05。供受者關(guān)系為母子/女治療組較父子/女治療組患者也具有明顯的治療優(yōu)勢，兩組患者的1年隨訪治療有效率、總生存期、無進(jìn)展生存期、生活質(zhì)量總獲益率分別為18/24vs7/18、25.1±2.7vs13.7±3.2月、12.1±1.2vs7.5±1.3月、