親屬間HLA單倍體與全相合非體外去T細胞外周血干細胞移植臨床及免疫功能重建研究.pdf

1、目的：⑴研究應用清髓性預處理和個體化的按HLA位點不同的差異程度聯(lián)合多少不等的免疫抑制劑進行親屬間HLA單倍體相合非體外去T細胞外周血干細胞移植（PBSCT）治療惡性血液病，通過臨床和實驗室驗證適合臨床應用的能減少排斥和重度急性移植物抗宿主?。╝GVHD）的新移植方案，并對單倍體移植后免疫功能重建進行研究；⑵前瞻性對比研究同期親屬間HLA單倍體與HLA全相合非體外去T細胞PBSCT治療惡性血液病的移植效果，探討HLA單倍體移植是否可以取

2、得與HLA全相合非體外去T細胞PBSCT治療惡性血液病相似的植入、移植物抗宿主?。℅VHD）發(fā)生率、腫瘤復發(fā)率及長期無白血病生存率（LFS）；⑶前瞻性的對比研究同期HLA單倍體與HLA全相合非體外去T細胞PBSCT后兩組患者T、B、NK細胞亞群的動態(tài)變化，探討PBSCT后免疫功能重建的特點，并對發(fā)生主要并發(fā)癥與未發(fā)生患者的免疫功能重建進行對比研究。
　　 方法：⑴HLA單倍體相合PBSCT治療惡性血液病52例，患者中位數(shù)年齡38

3、（11～47）歲，男32例，女20例，HLA1個位點不合9例，2～3個位點不合43例。惡性血液病按移植時病情分為標危型36例，高危型16例。HLA-A、B及DR位點分型均采用微量順序特異引物聚合酶鏈反應（微量PCR-SSP）方法進行。預處理方案為清髓性的，主要采用阿糖胞苷（Ara-C）+馬利蘭（Bu）+環(huán)磷酰胺（Cy）方案，預防GVHD均以環(huán)孢素（CsA）加短程甲氨蝶呤（MTX）為基礎方案，HLA1個位點不合時加用霉酚酸酯（MMF），H

4、LA2～3個位點不合時在加用MMF基礎上再聯(lián)合抗胸腺細胞球蛋白（ATG）及抗CD25單克隆抗體，CsA于-1d開始使用，劑量為2.5mg·kg-1·d-1，能口服時改為5mg·kg-1·d-1，于+180d后逐漸減量，減到原劑量的2/3，到11個月后逐漸減量直到停用，MTX靜脈滴注劑量為+1d15mg/m2，+3、+6、+11d劑量為10mg/m2，MMF用量為1g·d-1分2次口服，于-1d開始，如無aGVHD，于+40d減半量，+9

5、0～+100d停用；兔抗人ATG2.5mg·kg-1·d-1×4d（-4～-1d）；抗CD25單克隆抗體20mg于0天輸注干細胞前及+4d各靜點1次。使用粒細胞集落刺激因子（G-CSF）對供者進行PBSC動員，劑量為7～10μg·kg-1·d -1，于動員后第5及第6天用血液細胞分離機（COBE Spectra）進行PBSC單采，采集前檢測供者血常規(guī)（包括白細胞計數(shù)及血涂片瑞氏染色后白細胞分類），采集后檢測PBSC單個核細胞數(shù)及CD34

6、+細胞數(shù)并將PBSC經中心靜脈回輸給患者；⑵同期111例惡性血液病患者異基因PBSCT（allo-PBSCT），其中單倍體相合移植患者51例，同期全相合移植患者60例。預處理方案均為清髓性，主要采用改良Bu/Cy方案和Bu/Cy方案。單倍體與全相合移植患者均以經典CsA加短程MTX作為基礎方案預防GVHD，單倍體移植患者另根據(jù)HLA位點不合的程度加用MMF和（或）ATG及抗CD25單克隆抗體。患者在預處理前行鞘內注射MTX10～15mg

7、或口服甲基環(huán)已亞硝脲（Me-CCNU）預防腦膜白血病的發(fā)生。兩組患者發(fā)生aGVHD后均加用甲潑尼龍（MP）治療，發(fā)生慢性移植物抗宿主?。╟GVHD）后一般給予潑尼松加硫唑嘌呤治療。移植物為經G-CSF動員的未進行體外去除T細胞的PBSC；⑶采用間接免疫熒光法，主要試劑為CD3、CD4、CD8、CD19、CD16、CD56一抗及二抗，首先制備單個核細胞懸液，再進行T、B、NK亞群檢測。對移植前，移植后1月、3月、6月、12月及18月兩組患

8、者的T（CD3+、CD4+、CD8+）、B（CD19+）、NK（CD16+、CD56+）細胞亞群的動態(tài)變化，并進行組間比較。同時檢測100名健康人的T、B、NK亞群作為對照組，與單倍體組和全相合組移植前后各時間點免疫功能變化進行比較。
　　 結論：⑴清髓性預處理方案和依HLA不合位點差異的程度聯(lián)合多少不等含或不含ATG和抗CD25單克隆抗體免疫抑制劑的預防GVHD方案，移植物為經G-CSF動員的非體外去T細胞的PBSC的HLA單

9、倍體移植方案治療惡性血液病安全可行；⑵單倍體非體外去T細胞外周血干細胞移植造血功能重建快，供者易于接受，可多次采集，而重度aGVHD及廣泛型cGVHD發(fā)生率并不高；⑶HLA單倍體與HLA全相合非體外去T細胞的PBSCT治療惡性血液病時的植入、cGVHD發(fā)生率、復發(fā)率及長期LFS相似。單倍體移植時aGVHD高于全相合移植，但重度aGVHD發(fā)生率兩組相似；⑷單倍體與全相合非體外去T細胞外周血干細胞移植造血功能重建快，而重度aGVHD及廣泛型