EGCG干預(yù)因子VIIa及PAR2-AP誘導(dǎo)SW620細(xì)胞增殖與遷移的作用及其機(jī)制初探.pdf

1、目的:探討沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)對(duì)凝血因子Ⅶa及蛋白酶激活受體2激動(dòng)劑(PAR2-AP)誘導(dǎo)的結(jié)腸癌細(xì)胞株SW620增殖與遷移的干預(yù)作用；進(jìn)一步分析EGCG干預(yù)作用的相關(guān)分子機(jī)制。
　　 方法:(1)采用一定濃度EGCG、PAR2-AP、凝血因子Ⅶa等不同組合處理SW620細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期時(shí)相分布,MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖,Transwell法檢測(cè)細(xì)胞遷移

2、能力,分析EGCG對(duì)Ⅶa及PAR2-AP誘導(dǎo)的SW620細(xì)胞增殖與遷移效應(yīng)的阻斷作用。(2)激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞骨架的改變,分析PAR2-AP、因子Ⅶa對(duì)SW620細(xì)胞骨架的影響,并觀察EGCG對(duì)此有無(wú)阻斷作用。(3)分別采用熒光定量PCR、Western blotting、TF活性測(cè)定試劑盒及ELISA試劑盒檢測(cè)上述不同組合處理的細(xì)胞表達(dá)組織因子(TF)、半胱氨酸蛋白酶7(Caspase-7)及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的水

3、平,分析EGCG是否干預(yù)Ⅶa及PAR2-AP對(duì)細(xì)胞表達(dá)相關(guān)效應(yīng)分子的調(diào)節(jié)作用。(4)利用Western blotting進(jìn)一步檢測(cè)上述不同組合處理的細(xì)胞內(nèi)ERK1／2磷酸化水平、NF-κB抑制蛋白(IκB-α)、細(xì)胞核NF-κB(p65／RelA)的蛋白水平變化,探討EGCG對(duì)Ⅶa及PAR2-AP誘導(dǎo)細(xì)胞增殖遷移的干預(yù)作用的分子機(jī)制。
　　 結(jié)果:(1)EGCG(100μg／mL)可抑制因子Ⅶa(10 nmol／L)對(duì)SW620

4、細(xì)胞S期比率的升高作用；抑制PAR2-AP(100μmol／L)及Ⅶa對(duì)細(xì)胞增殖、遷移的促進(jìn)作用。(2)EGCG(100μg／mL)能夠削弱PAR2-AP及Ⅶa引起的SW620細(xì)胞骨架重組與絲狀偽足的形成。(3)EGCG(100μg／mL)能夠顯著降低PAR2-AP及Ⅶa對(duì)SW620細(xì)胞表達(dá)TF(mRNA及活性)、MMP-9(活性)的促進(jìn)作用,以及對(duì)Caspase-7(mRNA及蛋白)表達(dá)的下調(diào)作用。(4)EGCG呈劑量依賴性地抑制Ⅶa

5、對(duì)SW620細(xì)胞ERK1／2磷酸化的增強(qiáng)作用,阻斷Ⅶa對(duì)IκB-α及核NF-κB(p65／RelA)表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。EGCG(100μg／mL)同時(shí)阻斷PAR2-AP對(duì)ERK1／2磷酸化、IκB-α、核NF-κB(p65／RelA)表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。
　　 結(jié)論:(1)茶多酚EGCG顯著抑制因子Ⅶa及PAR2-AP誘導(dǎo)SW620細(xì)胞增殖與遷移的作用,并直接削弱Ⅶa及PAR2-AP對(duì)細(xì)胞骨架蛋白的排列及絲狀偽足生成的促進(jìn)作用。