SOX2與Wnt-β-catenin信號(hào)通路對(duì)結(jié)直腸癌SW620細(xì)胞株上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用.pdf

1、目的：通過慢病毒介導(dǎo)的基因干涉技術(shù)沉默結(jié)直腸癌細(xì)胞株 SW620中 SOX2 mRNA的表達(dá)，探討 SOX2、Wnt/β-catenin信號(hào)通路在結(jié)直腸癌細(xì)胞 EMT發(fā)生、發(fā)展過程中的作用機(jī)理和相互間的關(guān)系。
　　方法：采用包裝好的慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染 SW620癌細(xì)胞后篩選耐藥菌株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，倒置相差顯微鏡下分別觀察基因干涉組及陰性對(duì)照組細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)變化及劃痕實(shí)驗(yàn)中的細(xì)胞遷移能力，應(yīng)用RT-PCR和Western Blot方法分別

2、檢測(cè)兩組細(xì)胞中SOX2、β-catenin、E-cadherin、Vimentin的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)。
　　結(jié)果：1細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察：與陰性對(duì)照組相比較，基因干擾組 SW620癌細(xì)胞的形狀由長(zhǎng)梭形向圓形、卵圓形過渡，細(xì)胞偽足伸出減少或者消失，細(xì)胞間距減小、密度增加。2劃痕實(shí)驗(yàn)：與陰性對(duì)照組細(xì)胞比較，基因干擾組細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力減弱，遷移至劃痕中央處的細(xì)胞少。3 RT-PCR：基因干擾組 SOX2、β-catenin和Vimenti

3、n mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為0.25±0.04、0.20±0.03、0.19±0.03，上述三種因子的相對(duì)表達(dá)量明顯低于對(duì)照組的相對(duì)表達(dá)量0.72±0.06、0.71±0.05、0.65±0.05，而 E-cadherin mRNA的相對(duì)表達(dá)量為0.87±0.04，表達(dá)明顯高于對(duì)照組的相對(duì)表達(dá)量0.31±0.04，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)四種因子的mRNA的表達(dá)情況進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示：SOX2 mRNA和β-cat

4、enin mRNA表達(dá)呈正相關(guān)（R＝0.910，P＝0.012），SOX2 mRNA和Vimentin mRNA表達(dá)呈正相關(guān)（R＝0.829，P＝0.042），SOX2 mRNA和E-cadherin mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（R＝-0.841，P＝0.036），β-catenin mRNA和Vimentin mRNA表達(dá)呈正相關(guān)（R＝0.886，P＝0.019)，β-catenin mRNA與 E-cadherin mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(

5、R＝-0.899，P＝0.015)。4 Westen blot：基因干擾組 SOX2蛋白、β-catenin蛋白和Vimentin蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為0.33±0.02、0.18±0.02、0.29±0.02，三種因子的相對(duì)表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組三種因子的相對(duì)表達(dá)量0.68±0.06、0.70±0.04、0.65±0.04均明顯降低，E-cadherin蛋白的相對(duì)表達(dá)量為0.78±0.02，表達(dá)明顯高于對(duì)照組的相對(duì)表達(dá)量0.31±0.03

6、，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)四種因子在蛋白層面的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示：SOX2蛋白和β-catenin蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(R＝0.841，P＝0.036)，SOX2蛋白和Vimentin蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(R＝0.829，P＝0.042)，SOX2蛋白和E-cadherin蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(R＝-0.928，P＝0.008)，β-catenin蛋白和Vimentin蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(R＝0.844，P＝0.034)，β-