犬新孢子蟲吉林株SAG1基因的真核表達及免疫學評價.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、新孢子蟲?。∟eosporiasis）是由犬新孢子蟲（Neosporacaninum）寄生于多種動物細胞內而引起孕畜流產、死胎以及新生胎兒運動神經系統(tǒng)紊亂的一種原蟲病。該病對牛的危害尤為嚴重，已經給養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大的經濟損失。而目前尚未有有效的治療藥物和疫苗來控制該病的發(fā)生和發(fā)展，因此疫苗的研究是當前研究新孢子蟲病的熱點問題。
　　本試驗根據 GenBank中已發(fā)表的犬新孢子蟲 SAG1基因的核苷酸序列(AF132217)，設計、

2、合成了一對含有 Kozak序列、起始密碼子、終止密碼子、Bam HⅠ和Eco RⅠ酶切位點的特異性引物，采用PCR技術擴增犬新孢子蟲SAG1基因片段，克隆到 pMD18-T simple載體上，進行 PCR、酶切鑒定及序列分析。將鑒定正確的SAG1基因片段克隆至pVAX1真核表達載體中，PCR、酶切鑒定及序列分析后轉染至 BHK21細胞，應用 IFAT和 RT-PCR方法檢測重組質粒在 BHK21細胞中表達情況。最后將提取重組質粒pVA

3、X-SAG1免疫BALB/c小鼠，應用間接ELISA和流式細胞技術檢測體液免疫水平和細胞免疫水平。
　　結果表明，克隆的SAG1基因片段長780bp,編碼260個氨基酸，與已發(fā)表的美國株犬新孢子蟲 SAG1基因核苷酸序列(AF132217)的同源性為99％，氨基酸序列同源性為98.8%。IFAT和RT-PCR證實重組質粒在BHK21細胞中獲得表達。表達的重組質粒pVAX-SAG1免疫BALB/c小鼠后，誘導產生的體液免疫水平顯著高

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