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1、目的;從弓形蟲昆山分離株和RH株總DNA中克隆GRA6基因片段,構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-GRA6,與該實驗室已構(gòu)建好的重組質(zhì)粒pGEX-SAG1分別導(dǎo)入大腸桿菌中表達,且對表達產(chǎn)物進行純化,以純化的該兩種重組蛋白作為診斷抗原,構(gòu)建新型弓形蟲基因工程診斷試劑合,用于檢測弓形蟲感染及鑒別急、慢性期弓形蟲病.結(jié)論:1.①懷形蟲昆山分離株和RH株GRA6基因片段幾乎完全一致;②在大腸桿菌中得到了高效表達的可溶性重組蛋白GST-GRA6;③該重組蛋
2、白能被弓形蟲感染者血清特異性IgM和IgG所識別,可用于構(gòu)建具有高度敏感性和特異性的弓形蟲感染檢測試劑盒.用純化的GRA6重組蛋白構(gòu)建的ELISA診斷試劑盒和DIGFA診斷試劑盒對弓形蟲感染者血清進行檢測,其結(jié)果一致.2.①在大腸桿菌中表達了GST-SAG1重組蛋白;②通過改變培養(yǎng)溫度和LB培養(yǎng)液pH,首次成功地在上清液中得到了可溶性SAG1重組蛋白;③該可溶性重組蛋白能被急性期弓形蟲感染者血清IgM所識別,可用于構(gòu)建弓形蟲檢測試劑盒,
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