慢性EAE模型C57BL-6小鼠EBI3mRNA和P28mRNA表達的研究.pdf

1、目的 運用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)觀察IL-27兩個亞單位EB工3mRNA和P28 mRNA在慢性EAE模型C57BL／6小鼠腦和脊髓動態(tài)表達變化，探討其在EAE發(fā)病機制中的作用。 方法 72只近交系無特定病原體(SPF)級8-lO周健康雌性C57BL／6J小鼠，體重18-22克，隨機分為空白對照組、佐劑組和模型組。模型組中發(fā)病小鼠又分為發(fā)病前、發(fā)病初、發(fā)病高峰和慢性期組。用人工合成的MOG35-55和自制的完全弗

2、氏佐劑免疫C57BL／6J小鼠制成慢性EAE動物模型，每只小鼠注射0.2ml，其中含人工合成的MOG<,35-55>300ug，完全福氏佐劑2mg，分4點皮下注射，基礎(chǔ)免疫1周后用同樣劑量加強免疫一次；免疫當天和48小時后每只小鼠經(jīng)尾靜脈注射百日咳毒素0.5mg。免疫當天定為第0天起至第32天實驗終止前，每天8AM-8PM觀察動物行為活動，采用盲法，每天2人至少一次在同一時間稱體重并按Benson評分標準做EAE嚴重性的臨床評估，模型的

3、成功與否主要根據(jù)Benson評分標準判定和病理學檢查，結(jié)合MR工結(jié)果綜合評價；RT-PCR技術(shù)觀察空白對照組、佐劑對照組和模型組發(fā)病前、發(fā)病初、發(fā)病高峰和慢性期組腦和脊髓EBl3mRNA和P28 mRNA的表達變化。 結(jié)果 1．動物模型 慢性EAE模型累計成功率為83.3％，死亡率為8.3％，模型組 在第一次免疫后14-20天發(fā)病，20-24天達高峰，28-32天緩解，發(fā)病小鼠體重明顯減輕；空白對照組和佐

4、劑對照組體重呈增加趨勢，Benson標準評分為0分。發(fā)病小鼠HE和Weil氏髓鞘染色示小血管周圍炎癥細胞浸潤和髓鞘脫失；1.5T頭部和脊髓掃描發(fā)現(xiàn)，EAE組病變在MRI冠狀切面，橫斷面T2加權(quán)像及水抑制像可見多個散在長T2高信號，但在T1加權(quán)像及脊髓信號不易辨認。2.RT-PCR分別計算EBl3的光密度值／β-actin的光密度值比值和P28的光密度值／β-actin的光密度值比值。 空白對照組小鼠腦和脊髓EBl3 mRNA和P

5、28 mRNA的表達與佐劑對照組小鼠腦和脊髓EBl3 mRNA和P28 mRNA的表達相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 2.1 P28 mRNA的表達變化： 對照組小鼠腦和脊髓僅有低水平的P28 mRNA表達。MOG35-55免疫C57BL／6小鼠誘導的慢性EAE模型小鼠在發(fā)病初即可見CNS中P28 mRNA表達升高，并且一直持續(xù)至發(fā)病高峰期與慢性期；而且，與發(fā)病初期比，發(fā)病高峰期、慢性期P28 mRNA的表達水平

6、較高(與對照組相比均有統(tǒng)計學意義，P<0.01)。 2.2 EBl3 mRNA的表達變化： 對照組小鼠腦和脊髓僅有少量EBl3 mRNA表達。MOG35-55免疫C57BL／6小鼠誘導的慢性EAE模型小鼠在發(fā)病初即可見CNS中EBl3 mRNA表達升高(與相比均有統(tǒng)計學意義，P<0.01)；發(fā)病高峰時表達達高峰(A3與對照組相比有統(tǒng)計學意義，P<0.01)，慢性期時開始下降但仍持續(xù)高于對照組(A4與對照組相比有統(tǒng)計學意義