C57BL-6鼠內(nèi)耳形態(tài)發(fā)育及相關(guān)蛋白表達(dá)的比較研究.pdf

1、目的：為了深入了解C57BL/6小鼠內(nèi)耳形態(tài)發(fā)育的一般規(guī)律及內(nèi)耳發(fā)育過(guò)程中相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。 方法： 本實(shí)驗(yàn)以C57BL/6小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。對(duì)E8-Da的C57BL/6小鼠的內(nèi)耳發(fā)育時(shí)間段的內(nèi)耳標(biāo)本進(jìn)行冰凍切片處理。運(yùn)用HE常規(guī)染色、三維重建技術(shù)、掃描電鏡和基因蛋白表達(dá)免疫組織化學(xué)分析技術(shù)進(jìn)行研究分析。 結(jié)果： ①HE常規(guī)染色大體觀上了解了C57BL/6小鼠內(nèi)耳形態(tài)發(fā)育E8-Da期間的一般規(guī)律并且獲得了

2、E13的三維立體圖像；②獲得了各種聽(tīng)功能密切相關(guān)的結(jié)構(gòu)的成熟時(shí)間點(diǎn)，基底膜(D10)、鼓階前庭階(D4)、螺旋器隧道(D12)、內(nèi)螺旋溝(D10)、蓋膜(D10)、毛細(xì)胞(D12)、螺旋神經(jīng)元(D12)和蝸軸纖維(D12-D14)；③完成了前神經(jīng)決定蛋白、神經(jīng)分化蛋白、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和神經(jīng)元特異性蛋白等內(nèi)耳發(fā)育相關(guān)的蛋白的表達(dá)時(shí)限表并詳細(xì)觀察了其在內(nèi)耳各個(gè)部位表達(dá)隨發(fā)育變化的特點(diǎn)；④calbindin在E16以后的螺旋神經(jīng)元沒(méi)有表達(dá)，但是

3、在scarpa神經(jīng)元持續(xù)表達(dá)。而NCS1在兩者中都有表達(dá)：⑤Calbindin在E19-D22期間的毛細(xì)胞表達(dá)，但是在成年沒(méi)有表達(dá)，并且內(nèi)毛細(xì)胞出現(xiàn)表達(dá)較外毛細(xì)胞早，而表達(dá)消失較外毛細(xì)胞晚。MyosinⅦa在D1-D7的毛細(xì)胞清晰表達(dá)，但是D12表達(dá)漸弱，尤其是外毛細(xì)胞。⑥在C57BL/6鼠內(nèi)耳發(fā)育過(guò)程中血管紋處有GAP-43，Peripherin，Neurofilament，BDNF，NT3和TUJ-1的表達(dá)；⑦神經(jīng)元干細(xì)胞的標(biāo)記物I

4、sletl的表達(dá)從E16螺旋神經(jīng)元所在的位置有大量的細(xì)胞核表達(dá)開(kāi)始，一直到D7表達(dá)開(kāi)始減弱，到D12表達(dá)的方式變?yōu)轭w粒樣表達(dá)。 結(jié)論： ①聽(tīng)功能相關(guān)的重要結(jié)構(gòu)的成熟時(shí)間，提示C57BL/6小鼠的耳蝸要發(fā)揮聽(tīng)覺(jué)功能應(yīng)該在D12和D14之間。②內(nèi)耳發(fā)育過(guò)程中位于螺旋器隧道下的管腔結(jié)構(gòu)不是螺旋血管，該結(jié)構(gòu)的作用未明，可能是一個(gè)與螺旋器發(fā)育密切相關(guān)的發(fā)育期結(jié)構(gòu)。③螺旋神經(jīng)元與scarpa神經(jīng)元在鈣離子相關(guān)的生命活動(dòng)中存在差異。④

5、Calbindin在毛細(xì)胞表達(dá)有時(shí)限性，可作為新生毛細(xì)胞的特異性標(biāo)志物。⑤TUJ-1 對(duì)內(nèi)外毛細(xì)胞的傳入和傳出神經(jīng)纖維染色，并推測(cè)外毛細(xì)胞中傳入纖維發(fā)育比傳出神經(jīng)纖維遲。Peripherin對(duì)傳入神經(jīng)纖維染色而neurofilament可能對(duì)傳出神經(jīng)纖維染色。⑥血管紋中存在神經(jīng)來(lái)源的細(xì)胞組織，可能是黑素細(xì)胞(暗細(xì)胞)。⑦在C57BL/6小鼠的內(nèi)耳中，D7前的螺旋神經(jīng)元仍然具有神經(jīng)元干細(xì)胞的特性。⑧TUJ-1在鳥(niǎo)類(lèi)和C57BL/6鼠內(nèi)外毛