生發(fā)酊對C57BL-6小鼠毛發(fā)生長作用的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 本課題旨在觀察生發(fā)酊對動物模型小鼠毛發(fā)的生長周期、毛囊內(nèi)細(xì)胞凋亡的影響，評價其治療脫發(fā)的療效并探討其作用機理，并為進(jìn)一步擴大該方的臨床治療范圍提供有力的實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 （1）取40只近交系C57BL/6小鼠，按小鼠體重編號，后采用隨機排列表法隨機分為生發(fā)酊組、陽性對照組、陰性對照組、模型對照組，每組10只。經(jīng)乙醚麻醉后用松香/石蠟混合物（1:1）熱融化后，涂于小鼠背部，待凝固變硬后揭

2、去，以小鼠背部光滑，無傷無毛根為凈，誘導(dǎo)其毛發(fā)由休止期進(jìn)入生長期，脫毛面積約2×2cm2。脫毛后第2天起分別于脫毛區(qū)涂抹生發(fā)酊、寶發(fā)堂六味防脫生發(fā)酊、75％酒精，每日兩次，每次0.2ml/只，模型組不涂任何藥。自涂藥后第2天起，觀察小鼠背部脫毛部位皮膚每天顏色的變化確定毛囊的生長狀態(tài)，以及肉眼直觀觀察脫毛區(qū)毛發(fā)生長情況。每日對每鼠脫毛區(qū)新毛生長狀況評分一次。
　　 （2）實驗第17天各組頸椎脫臼處死8只小鼠，背部平行脊柱相同部位

3、取材，10％甲醛固定，脫水，石蠟包埋，切片，HE染色，封片，光鏡下進(jìn)行毛囊形態(tài)學(xué)分期，每只小鼠隨機選擇50個毛囊，確定各組毛囊所處的周期，計算平均毛發(fā)周期評分及生長期VI期、退行早期、退行中期、退行晚期毛囊所占百分比。
　　 （3）于拔毛后第17天在各組處死小鼠脫毛部位平行于脊柱相同部位取材，10％甲醛固定，脫水，石蠟包埋，切片，鋪片于多聚賴氨酸載玻片上，用原位雜交技術(shù)TUNEL法檢測毛囊內(nèi)細(xì)胞凋亡狀況。切片置光鏡下觀察，標(biāo)記為

4、褐黃色的物質(zhì)即為凋亡小體，每張切片選染色最強的部位400倍鏡下觀察5個視野，計數(shù)每個視野中的凋亡小體并取其均數(shù)。
　　 （4）各組預(yù)留2只小鼠觀察40天并記錄背部毛發(fā)生長情況。
　　 結(jié)果：
　　 實驗過程中生發(fā)酊組、陽性對照組比陰性對照組、模型對照組小鼠背部皮膚變黑時間較早，毛發(fā)生長速度較快，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），生發(fā)酊組與陽性對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）。造模后第17天，生發(fā)酊組與陽性