丹皮對(duì)C57BL-6小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性肝炎的保護(hù)作用及機(jī)制探討.pdf

1、自身免疫性肝炎(AIH)是一種以自身免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)的慢性進(jìn)行性炎癥性肝病，最終導(dǎo)致纖維化形成和肝硬化。女性多見，免疫抑制劑通常有效。組織學(xué)表現(xiàn)為匯管區(qū)大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，血清學(xué)表現(xiàn)為非肝特異性循環(huán)自身抗體的出現(xiàn)，轉(zhuǎn)氨酶升高，γ球蛋白或IgG升高。目前其病因未明，發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚。 研究表明，核因子-κB(NF-κB)、細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及白細(xì)胞介素-6(IL-6)等炎性細(xì)胞因子、

2、粘附分子在肝臟炎癥、肝纖維化的發(fā)生及發(fā)展過程中起重要作用。NF-κB及其上述調(diào)控產(chǎn)物在AIH發(fā)病過程中的作用如何，研究相對(duì)較少。 近年研究發(fā)現(xiàn)，通過免疫手段，用C57BL/6近交系小鼠肝臟提取物與弗氏完全佐劑混合作為抗原，對(duì)同種系小鼠腹腔注射建立的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性肝炎(EAH)動(dòng)物模型，其病變特點(diǎn)與人類慢性肝炎非常接近，是研究人類自身免疫性肝炎比較理想的模型。 目前對(duì)AIH尚無根治性治療措施，主要是腎上腺糖皮質(zhì)激素或激素

3、與硫唑嘌呤聯(lián)合應(yīng)用以延緩病情發(fā)展。此種療法需長(zhǎng)期服用，毒副作用較大，停藥后容易復(fù)發(fā)，且并非對(duì)所有患者都有效，因此有必要拓展AIH的治療思路，尋找新的治療靶點(diǎn)。有報(bào)道中藥丹皮(Cortexmoutan)對(duì)免疫性肝損傷、急性化學(xué)性肝損傷有較強(qiáng)的保護(hù)作用，提示丹皮對(duì)自身免疫性疾病有潛在的治療價(jià)值。 目的：通過建立EAH模型，并施與中藥丹皮干預(yù)，觀察NF-κB、ICAM-1、TNF-α及IL-6的表達(dá)情況，從分子生物學(xué)角度探討其在AIH

4、免疫性肝損傷中的作用，探討丹皮對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性肝炎的保護(hù)作用及機(jī)制。 方法：采用同種系小鼠肝臟提取物即肝抗原S-100與等體積弗氏完全佐劑混勻后，予小鼠腹腔注射，建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性肝炎模型。40只4周齡雄性C57BL/6小鼠，造模時(shí)體重為20.35±0.93g，隨機(jī)分成四組：正常對(duì)照組、模型組、丹皮組和強(qiáng)的松龍組。對(duì)照組不做任何處理，普通飼養(yǎng)，模型組、丹皮組和強(qiáng)的松龍組予腹腔注射S-100與等體積弗氏完全佐劑混勻物，每周1次

5、，共4次。同時(shí)強(qiáng)的松龍組灌服強(qiáng)的松龍片劑混懸液，丹皮組灌服丹皮煎劑，每日1次，共4周。于第5周處死所有動(dòng)物，分離血清以檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、白蛋白(albumin，A)、球蛋白(globulin，G)；取肝臟組織用于HE染色、核酸分子原位雜交染色檢測(cè)NF-κB和ICAM-1、免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)TNF-α和IL-6，免疫組織化學(xué)和核酸分子原位雜交染色結(jié)果以陽性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比表示。

6、 結(jié)論： 1.采用腹腔注射肝抗原S-100與弗氏完全佐劑，成功復(fù)制(EAH)動(dòng)物模型，結(jié)果表明此方法可以引發(fā)小鼠自身免疫性肝損傷。 2.NF-κB及其調(diào)控的ICAM-1、TNF-α、IL-6在EAH模型中均有表達(dá)，提示NF-κB及其調(diào)控產(chǎn)物參與了EAH肝損傷的發(fā)病過程。 3.丹皮對(duì)同種肝抗原S-100誘發(fā)的EAH免疫性肝損傷有一定的保護(hù)作用。 4.丹皮對(duì)NF-κB及其調(diào)控的ICAM-1、TNF-α、IL