羅格列酮對(duì)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞氟尿嘧啶化療增敏作用實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體γ(peroxisomeproliferator-activated receptor gammar，ppary)配體羅格列酮(Rosiglitazone)對(duì)人結(jié)腸癌氟尿嘧啶化療增敏作用。
　　 方法：體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞，分別或聯(lián)合應(yīng)用不同濃度的羅格列酮、氟尿嘧啶(fluorouracil，5-Fu)處理人結(jié)腸癌細(xì)胞系(HT-29)細(xì)胞，MTT比色法測(cè)定藥物對(duì)細(xì)胞增殖抑制作用，臺(tái)

2、盼藍(lán)染色細(xì)胞計(jì)數(shù)法觀測(cè)藥物對(duì)HT-29細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的影響，PI染色流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析、吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)熒光染色法觀察細(xì)胞凋亡率。用Westernblot法檢測(cè)HT-29細(xì)胞PPARγ、NF-KB、Bcl-2、Bax的表達(dá)。初步探討羅格列酮對(duì)人結(jié)腸癌氟尿嘧啶化療增敏作用的分子機(jī)制。
　　 結(jié)果：(1)MTT比色法結(jié)果顯示5-Fu對(duì)HT-29細(xì)胞增殖具有抑制作用，其IC50為8.05μg/ml，羅格列酮對(duì)HT-2

3、9細(xì)胞增殖亦有抑制作用，其IC50為140.7μmol/L；無(wú)細(xì)胞毒濃度(1.0μ mol/L)羅格列酮能顯著增強(qiáng)5-Fu對(duì)HT-29細(xì)胞增殖抑制作用，聯(lián)合應(yīng)用時(shí)IC50為1.66μg/ml。羅格列酮與5-Fu合用的CI值為0.218，CI小于1，表明羅格列酮和氟尿嘧啶合用具有協(xié)同作用。(2)臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞計(jì)數(shù)法顯示：羅格列酮抑制體外培養(yǎng)的HT-29細(xì)胞生長(zhǎng)，且呈明顯的劑量-時(shí)間依賴方式；1.0、10.0μmol/L羅格列酮對(duì)HT-29

4、細(xì)胞無(wú)顯著毒性作用(IR<10％)，其與5-Fu合用時(shí)能增強(qiáng)5-Fu對(duì)HT-29細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用；與細(xì)胞計(jì)數(shù)繪制生長(zhǎng)曲線結(jié)果一致。無(wú)細(xì)胞毒濃度1.0μmol/L羅格列酮能夠顯著增強(qiáng)6.0μg/ml5-Fu對(duì)HT-29細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制，使HT-29細(xì)胞群體倍增時(shí)間延長(zhǎng)至900小時(shí)，比DMSO對(duì)照組延長(zhǎng)15倍。(3)AO/EB熒光雙染色法和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示：5-Fu能明顯誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡，呈劑量依賴性。3.0，6.0，12.0μmol

5、/mL處理HT-29細(xì)胞72h，細(xì)胞凋亡率分別為13.91％，18.16％，23.14％，羅格列酮亦能誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡，呈劑量依賴性。1.0，10.0，100.0μmol/L羅格列酮處理HT-29細(xì)胞72h后，細(xì)胞凋亡率分別為1.44％，2.34％，14.13％。無(wú)細(xì)胞毒濃度的羅格列酮能顯著促進(jìn)5-Fu誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡。1.0μmol/L羅格列酮與12.0μg/ml5-Fu合用使HT-29細(xì)胞凋亡率高達(dá)48.41％。(4)W

6、erstern blot法結(jié)果顯示HT-29細(xì)胞表達(dá)PPARγ，羅格列酮作用HT-29細(xì)胞后上調(diào)PPARγ和Bax蛋白的表達(dá)，下調(diào)NF-κB、Bcl-2蛋白的表達(dá)，且呈濃度依賴性(P<0.05)。
　　 結(jié)論：(1)無(wú)細(xì)胞毒濃度下(1.0μmol/L)羅格列酮能增強(qiáng)5-Fu對(duì)HT-29細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖抑制作用。(2)無(wú)細(xì)胞毒濃度下(1.0μmol/L)羅格列酮能促進(jìn)5-Fu誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡。(3)羅格列酮的化療增敏作用可能與