動(dòng)態(tài)血管發(fā)育模型的建立及其miRNA的變化.pdf

1、目的：建立雞胚絨毛尿囊膜動(dòng)態(tài)血管發(fā)育模型，觀察和分析血管發(fā)育過程中miRNA的表達(dá)變化，為確定血管發(fā)育關(guān)鍵調(diào)控miRNA及其下游基因提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：利用雞胚絨毛尿囊膜血管發(fā)育周期短，可操作性強(qiáng)的特點(diǎn)，選取新鮮、大小均勻的種蛋，自行孵育，原位觀察第一天到第二十一天的雞胚絨毛尿囊膜血管發(fā)育情況，確定尿囊膜血管初生、旺盛和消退的三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，建立動(dòng)態(tài)血管發(fā)育模型。選取不同時(shí)間點(diǎn)的尿囊膜血管，提取蛋白，用Western blotti

2、ng技術(shù)檢測(cè)FGF2和TGF-β2蛋白在血管發(fā)育的這三個(gè)階段的表達(dá)量的變化，判斷動(dòng)態(tài)血管發(fā)育模型是否建立成功。用Trizol法提取總RNA，紫外吸收測(cè)定法測(cè)RNA濃度和純度，瓊脂糖凝膠電泳觀察28s、18s帶，檢測(cè)提取的RNA的質(zhì)量，制作miRNA芯片，分析在血管發(fā)育過程中miRNA的變化。 結(jié)果：研究發(fā)現(xiàn)第四天、第十三天、第十六天分別為血管發(fā)育的初生、旺盛和消退的三個(gè)時(shí)間點(diǎn)；Western blotting檢測(cè)結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道相

3、符；血管發(fā)育過程中miRNA的表達(dá)變化： ⑴、旺盛期與初生期比較：表達(dá)上調(diào)的有5個(gè)miRNA，表達(dá)下調(diào)的有1個(gè)miRNA； ⑵、消退期與初生期比較：表達(dá)上調(diào)的有37個(gè)miRNA，表達(dá)下調(diào)的有4個(gè)miRNA； ⑶、消退期與旺盛期比較：表達(dá)上調(diào)的有27個(gè)miRNA，表達(dá)下調(diào)的有2個(gè)miRNA。 結(jié)論： 1、利用雞胚絨毛尿囊膜血管動(dòng)態(tài)發(fā)育周期短，血管發(fā)育過程中存在明顯的初生期、旺盛期、消退期不同階段，且