miR-130a敲除小鼠模型的建立及其對(duì)脂肪發(fā)育的影響.pdf

1、MicroRNAs（miRNA）作為脂肪內(nèi)穩(wěn)態(tài)的重要調(diào)節(jié)因子，在脂肪生成中發(fā)揮著重要的作用。體外研究表明miR-130a可通過直接靶向PPARγ調(diào)控脂肪代謝作用，但其在活體水平上的對(duì)脂肪代謝的影響尚未報(bào)道。本研究采用 Crisper/cas9技術(shù)制備miR-130a敲除小鼠，探討了miR-130a缺失后動(dòng)物對(duì)高能量的利用和代謝的分子機(jī)制。試驗(yàn)分為4組，分別用常規(guī)飼料（5 kcal％脂質(zhì)）和高脂飼料（60kcal%脂質(zhì)）飼喂野生型小鼠和

2、miR-130a敲除小鼠，飼喂期間對(duì)小鼠進(jìn)行葡萄糖耐受試驗(yàn)和胰島素耐受試驗(yàn)。飼喂9-14周后，對(duì)小鼠的脂肪組織和肝臟組織進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析和分子檢測，試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1.測序結(jié)果130KO小鼠的miR-130a基因被成功敲除，qRT-PCR結(jié)果表明130KO小鼠的miR-130a表達(dá)量顯著下降。
　　2.普通飼料飼養(yǎng)條件下，野生型（WT）小鼠和miR-130a敲除小鼠（130KO）的體重并無差異，高脂飼料飼養(yǎng)條件下130KO

3、小鼠體重顯著高于WT小鼠；解剖小鼠發(fā)現(xiàn)，130KO小鼠的皮下脂肪和肝臟都顯著重于WT小鼠；石蠟切片結(jié)果顯示130KO小鼠的脂肪細(xì)胞較大，油紅O染色顯示130KO小鼠肝臟中的甘油三酯相比WT小鼠顯著增多。
　　3.熒光定量PCR結(jié)果顯示，無論是普通飼料還是高脂飼料飼養(yǎng)下，130KO小鼠的三種脂肪生成標(biāo)記基因PPARγ、CEBP/α和LPL的表達(dá)量均有顯著地增加，高脂飼養(yǎng)下130KO小鼠皮下脂肪中IL6地表達(dá)量顯著高于WT小鼠。Wes

4、tern blot結(jié)果顯示，在高脂誘導(dǎo)下130KO小鼠的PPARγ的表達(dá)量增加。
　　4.葡萄糖和胰島素耐受試驗(yàn)結(jié)果顯示，在常規(guī)飼料和高脂飼料的兩種飼喂條件下，130KO小鼠相比于WT小鼠均表現(xiàn)出葡萄糖代謝能力下降。而在高脂誘導(dǎo)下，130KO小鼠出現(xiàn)明顯的胰島素拮抗現(xiàn)象。
　　綜上所述，本研究成功建立了miR-130a基因缺失小鼠模型，發(fā)現(xiàn)缺失miR-130a小鼠更容易出現(xiàn)肥胖，同時(shí) miR-130a基因敲除小鼠葡萄糖清除能