胃癌前病變癌變的動態(tài)監(jiān)測-外周血微小RNA預(yù)警模型的建立及其應(yīng)用.pdf

1、胃癌是全球惡性腫瘤死亡率的第二位，胃癌預(yù)后與診斷時期密切相關(guān)。但是目前臨床上缺乏高敏感性和特異性的有效胃癌診斷分子標(biāo)志物。尋找和驗證新的胃癌變監(jiān)測和早期診斷分子標(biāo)志物，對胃癌診斷和早期治療具有重要意義。
　　本研究通過胃癌、癌前病變、健康志愿者外周血樣本miRNA測序發(fā)現(xiàn)了一組胃癌癌變相關(guān)的miRNA，通過聚類分析及統(tǒng)計學(xué)方法篩選出可能的胃癌相關(guān)差異表達(dá)miRNA，并通過qRT-PCR技術(shù)驗證得到miR-331-3p和miR-19

2、7在胃癌、癌前病變、健康人外周血中存在明顯差異表達(dá)。同時，我們通過Logistic回歸方法建立的基于qRT-PCR檢測分析的胃癌監(jiān)測模型，并擴大樣本對普通人群進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)miR-331-3p和miR-197在健康人、癌前病變患者、胃癌患者外周血中的表達(dá)呈不同變化走向，并能基本區(qū)分3類患者，證明聯(lián)合檢測miR-331-3p和miR-197可能具有對胃癌變過程進(jìn)行監(jiān)測，早期檢測胃癌的重要價值。miR-331-3p和miR-197可能成為潛

3、在的可用于臨床的胃癌變監(jiān)測和早期胃癌診斷的分子標(biāo)志物。
　　研究步驟
　　1.胃癌外周血miRNA測序及分析
　　①第二代高通量測序分別檢測6例胃癌患者、6例胃癌前病變患者、6例健康志愿者外周血樣本miRNA表達(dá)圖譜;
　?、趯⑺袡z測到的小RNA與各類RNA的比對、注釋情況進(jìn)行總結(jié);
　?、蹖Σ煌瑯悠分斜磉_(dá)的miRNA進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，判斷其在胃癌患者、胃癌前病變患者、健康志愿者間表達(dá)量是否存在顯著性差異;

4、
　?、茴A(yù)測可能與胃癌相關(guān)的新的miRNA。
　　2.胃癌外周血miRNA可能標(biāo)志物的篩選及初步驗證
　?、偻ㄟ^聚類分析及統(tǒng)計學(xué)方法篩選進(jìn)一步驗證胃癌外周血分子標(biāo)志物的候選,miRNAs;
　　②利用實時PCR定量對6個候選miRNAs(miR-331-3p、miR-197、miR-23b*、miR-1260b、miR-3138、miR-3175)進(jìn)行小規(guī)模初步驗證（n=46，胃癌患者15例，胃癌前患者16例，健

5、康志愿者15例）;
　?、鄹鶕?jù)實時PCR結(jié)果，初步確定miR197和miR331-3p為潛在的分子標(biāo)志物，初步確定其判別胃癌的臨界值。
　　④對可能miRNA分子標(biāo)志物進(jìn)行靶基因預(yù)測，預(yù)測其可能生物學(xué)功能。
　　3.胃癌前病變癌變診斷模型的建立及普通人群監(jiān)測
　?、俑鶕?jù)Logistic分析和qRT-PCR檢測結(jié)果，構(gòu)建miR197和miR331-3p胃癌檢測模型，分析ROC曲線，確定檢測敏感度和特異度。
　

6、?、谶M(jìn)行普通人群檢測(n=302)，驗證胃癌檢測模型的檢測效能，評估聯(lián)合檢測miR197和miR331-3p在胃癌變各階段監(jiān)測的價值。
　　②qRT-PCR檢測分析miR197和miR331-3p外周血檢測對胃癌(n=95)和其他腫瘤(n=20)的腫瘤特異性區(qū)分能力。
　　研究結(jié)果
　　1.外周血miRNA測序結(jié)果提示胃癌、癌前病交、健康人的外周血清中存在一組差異表達(dá)的miRNAs。
　　2.根據(jù)外周血miRNA

7、測序結(jié)果，通過統(tǒng)計學(xué)分析，得到一組在胃癌、胃癌前病變及健康人之間可能存在差異表達(dá)的miRNAs: miR-331-3p、miR-197、miR-23b*、miR-1260b、miR-3138、miR-3175。
　　3.通過小規(guī)模qRT-PCR驗證和統(tǒng)計學(xué)分析，明確mir-23b*、mir-197、 mir-331-3p在胃癌與非癌人群外周血中存在顯著性差異表達(dá)。
　　4.通過Logistic回歸方法建立了基于qRT-PCR

8、檢測分析的胃癌監(jiān)測模型，并發(fā)現(xiàn)mir-197和mir-331-3p在區(qū)分癌與非癌時，具有較高的敏感度(74％)和特異度(72％)。
　　5.結(jié)合普通人群外周血的miRNAs分析，發(fā)現(xiàn)miR-331-3p和miR-197在健康人、癌前病交患者、胃癌患者外周血中的表達(dá)呈不同變化走向，其中胃癌組miR331-3p、miR-197表達(dá)同樣具有明顯差異性，但是區(qū)別在miR331-3p較癌前組表達(dá)更升高，而miR-197癌前組表達(dá)差異又可以將

9、癌前與叫胃癌組和正常組做區(qū)分均明顯升高。
　　6.小樣本外周血的miRNAs分析顯示，發(fā)現(xiàn)miR-331-3p和miR-197在胃癌患者和其他腫瘤患者外周血中不存在明顯的表達(dá)差異。
　　7.生物信息學(xué)分析提示miR331-3p和miR197的靶基因與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞周期調(diào)控密切相關(guān)。
　　研究結(jié)論
　　1.通過外周血miRNA測序得到一組在胃癌、胃癌前病變及健康人之間具有差異表達(dá)的miRNA。