納米纖維絲素蛋白與脫細(xì)胞基質(zhì)真皮在口腔黏膜修復(fù)重建中的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的:
　　利用納米纖維絲素蛋白支架與脫細(xì)胞基質(zhì)(牛皮,人皮)真皮材料,在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wister大鼠體內(nèi)建立口腔黏膜修復(fù)重建的動(dòng)物模型,針對(duì)重建后的口腔黏膜進(jìn)行組織病理學(xué)評(píng)價(jià),通過(guò)對(duì)比,評(píng)估納米纖維絲素蛋白作為組織工程口腔黏膜修復(fù)材料的可行性,為絲素蛋白材料修復(fù)重建口腔黏膜提供理論依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　1、動(dòng)物實(shí)驗(yàn):
　　清潔級(jí)雄性Wister大鼠80只,隨機(jī)分成四組,造成口腔黏膜缺損模型,A組為納米纖維

2、絲素蛋白修復(fù)口腔頰黏膜圓形缺損(直徑10mm),n=20;B組為牛皮脫細(xì)胞基質(zhì)修復(fù)口腔頰黏膜圓形缺損(直徑10mm),n=20;C組為人皮脫細(xì)胞基質(zhì)組修復(fù)口腔頰黏膜圓形缺損(直徑10mm),n=20;D組為空白對(duì)照組,凡士林油紗覆蓋口腔頰黏膜圓形缺損(直徑10mm),n=20,分別于術(shù)后一周、兩周、三周、四周后行大體觀察,組織學(xué)及免疫組織化學(xué)觀察。
　　2、口腔黏膜重建模型組織學(xué)觀察:
　　1)口腔黏膜重建術(shù)后一周、兩周、三

3、周、四周分別進(jìn)行全層口腔黏膜取材。
　　2)取材后進(jìn)行大體觀察,HE染色和免疫組化染色,從組織學(xué)水平動(dòng)態(tài)評(píng)價(jià)新生口腔黏膜變化并用免疫組化技術(shù)對(duì)各組新生黏膜的血管化及上皮角化程度進(jìn)行鑒定,對(duì)新生黏膜炎性細(xì)胞及成纖維細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比。
　　結(jié)果:
　　1、大鼠口腔黏膜重建手術(shù)模型成功,手術(shù)切口全部如期愈合,未見(jiàn)感染、血腫、排斥等并發(fā)癥。預(yù)期時(shí)間段取材,未見(jiàn)口腔黏膜攣縮,塌陷或修復(fù)材料脫出等,再生口腔黏膜組織生長(zhǎng)良好。
　

4、　2、納米纖維絲素蛋白與脫細(xì)胞基質(zhì)材料進(jìn)行口腔黏膜缺損修復(fù)效果基本一致,但初始上皮化的時(shí)間略晚。術(shù)后一周絲素蛋白材料排列較整齊,材料周圍炎性反應(yīng)明顯,絲素蛋白材料中較多炎性細(xì)胞,成纖維細(xì)胞及少量毛細(xì)血管長(zhǎng)入,尚未見(jiàn)到上皮結(jié)構(gòu)。絲素蛋白纖維上可見(jiàn)成纖維細(xì)胞。術(shù)后二周術(shù)區(qū)創(chuàng)緣可見(jiàn)新生上皮細(xì)胞,新生上皮層較薄,層數(shù)為3-4層,平坦,上皮細(xì)胞排列不規(guī)則,疏松,上皮細(xì)胞生長(zhǎng)活躍,固有層可見(jiàn)散在的小血管,毛細(xì)血管,固有層膠原排列較疏松。炎性反應(yīng)較前

5、明顯減輕,炎性細(xì)胞數(shù)量減少,成纖維細(xì)胞及毛細(xì)血管數(shù)量增多,絲素蛋白材料部分吸收降解,絲素材料短而稀疏。術(shù)后三周,新生上皮較厚,呈現(xiàn)多層結(jié)構(gòu),上皮腳及釘突出現(xiàn)較多,上皮多層結(jié)構(gòu)極向恢復(fù),排列較緊密,固有層內(nèi)炎性細(xì)胞較前明顯減少,固有層內(nèi)生成較多清晰血管,固有層內(nèi)膠原排列較前緊密,可見(jiàn)散在的平滑肌。絲素蛋白支架降解成碎片狀。四周新生上皮較厚,呈現(xiàn)多層結(jié)構(gòu),上皮腳釘突明顯,結(jié)構(gòu)與正常大鼠口腔黏膜無(wú)明顯區(qū)別,固有層內(nèi)膠原排列整齊,可見(jiàn)部分肌束形

6、成。上皮廣譜角蛋白抗體免疫組化染色證明新生口腔黏膜有上皮組織存在,且從重建第二周開(kāi)始出現(xiàn)陽(yáng)性,其結(jié)果與HE染色觀察結(jié)果一致。
　　結(jié)論:
　　1、進(jìn)一步完善實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大鼠構(gòu)建口腔黏膜缺損的模型制備,得到新生口腔黏膜組織學(xué)證據(jù),模型構(gòu)建穩(wěn)定可靠,證明實(shí)驗(yàn)用Wister大鼠是進(jìn)行口腔缺損性疾病研究的理想實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
　　2、從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物圍手術(shù)期和術(shù)后短期觀察結(jié)果以及新生口腔黏膜的大體和組織學(xué)觀察,證明利用納米纖維絲素蛋白材料來(lái)修