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文檔簡介
1、目的:研究精索靜脈曲張對大鼠睪丸以及生精功能的影響,掌握手術造模技術、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)以及顯微鏡對精子形態(tài)的觀察方法。了解透射電鏡對生精小管形態(tài)學變化的觀察方法。分析各組大鼠生精細胞中肺癌腫瘤抑制因子1(Tumor supressor in lung cancer1,TSLC1)表達情況以及和臨床指標間關系,包括睪丸重量、精子質量以及曲細精管的退行性變化,探討精索靜脈曲張引起不育的潛在機制。
方法:1.選取青春期
2、雄性Sprague-Daw1(SD)大鼠,分別分為4周對照組、4周實驗組;8周對照組、8周實驗組。實驗組通過手術部分結扎左腎靜脈造成左側精索靜脈曲張,對照組大鼠手術顯露過程與實驗組相同,但不施行血管結扎,單純關閉切口,在相同條件下飼養(yǎng)。
2.麻醉下切除左側睪丸,電子天平稱重,將部分曲細精管做成超薄切片,用透射電子顯微鏡觀察;Megaview數(shù)字化電鏡攝影系統(tǒng)攝片。其余曲細精管制成生精細胞懸液,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測
3、定TSLC1的表達。
3.取下左側附睪,放入PBS液中,制備成精子懸液,用Macro計數(shù)板于顯微鏡下計數(shù),計算精子濃度;另外再取樣本于載玻片上染色,光學顯微鏡下觀察精子的形態(tài),記錄其畸形率。
4.采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理,計量資料進行方差分析,兩變量之間的關系采用Spearman等級相關分析法。
結果:1.精索靜脈直徑:4周實驗組左側精索靜脈直徑(0.65±0.04mm)與同期對照
4、組(0.24±0.07mm)相比明顯增粗(P<0.01);8周實驗組左側精索靜脈直徑(0.73±0.03mm)與同期對照組(0.21±0.06mm)相比亦明顯增粗(P<0.01),均有統(tǒng)計學意義。
2.睪丸重量:4周實驗組左側睪丸平均重量(1.35±0.29g)與同期對照組(1.57±0.13g)相比減小(P<0.05);8周實驗組左側睪丸平均重量(1.05±0.12g)與同期對照組(1.60±0.17g)相比減小(P<0.0
5、1);8周實驗組左側睪丸平均重量與4周實驗組相比減小(P<0.01)。
3.精液分析:4周實驗組精子濃度(37.54±3.95×106/ml)與同期對照組(90.35±10.58×106/ml)相比減小(P<0.01);8周實驗組精子濃度(19.81±4.24×106/ml)與同期對照組(92.43±8.31×106/ml)相比減小(P<0.01);8周實驗組精子濃度與4周實驗組相比減小(P<0.01)。
4周實驗組
6、精子畸形率(25.43±1.22%)與同期對照組(5.74±1.01%)相比增加(P<0.01);8周實驗組精子畸形率(52.50±1.86%)與同期對照組(6.25±1.33%)相比增加(P<0.01);8周實驗組精子畸形率與4周實驗組相比增加(P<0.01)。
4.生精細胞 TSLC1表達:4周實驗組(18.51943±0.942876pg/ml)與同期對照組(27.37864±1.29343pg/ml)相比減少(P<0.
7、01);8周實驗組(14.96392±1.046725pg/ml)與同期對照組(25.56482±1.42657pg/ml)相比減少(P<0.01);8周實驗組與4周實驗組相比亦減少(P<0.01)。
5.電鏡觀察:實驗組與對照組相比,精原細胞、支持細胞異常,精子發(fā)育障礙;精母細胞、精子細胞胞質內出現(xiàn)大量空泡,細胞核異形,核膜皺縮,核結構不清。頂體形成異常,頂體缺失,或僅有小的頂體。精子尾部線粒體鞘缺失、不完整,或排列紊亂,線
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