Notch信號(hào)途徑對(duì)小鼠骨髓EPC和EOC的調(diào)控.pdf

1、EPC是成熟血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，屬干細(xì)胞群體，和HSC來自同一祖先細(xì)胞。在胚胎，EPC參與胚胎發(fā)育的血管發(fā)生，出生后，與HSC共同存在于骨髓干細(xì)胞龕中，也存在于外周血、臍血中，具有缺血區(qū)定向歸巢并分化為成熟內(nèi)皮細(xì)胞、促進(jìn)受損內(nèi)皮修復(fù)、血管新生等重要作用，不僅可應(yīng)用于對(duì)于缺血性疾病的治療，對(duì)腫瘤的防治也有重要價(jià)值。
　　EPC最早是從外周血中分離 CD34+細(xì)胞得到的，其表面標(biāo)志被認(rèn)定為CD34\CD133\KDR，但是隨著進(jìn)一

2、步的研究發(fā)現(xiàn) EPCs是一組異質(zhì)性的細(xì)胞群，它是由眾多處于不同分化階段的細(xì)胞組成，它的表面標(biāo)記隨時(shí)間改變而變化。研究顯示，雖然不同的培養(yǎng)方法和細(xì)胞來源使EPC的表面標(biāo)志不完全一致，但是目前體外培養(yǎng)的EPC有兩類，一類是梭型、增殖潛力有限、培養(yǎng)不超過8周的early EPC（EEPC），另一類是鵝卵石樣的、具有高增殖潛能、可以持續(xù)傳代培養(yǎng)的外向型生長內(nèi)皮細(xì)胞late EPC(EOC)。研究顯示，EEPC和EOC都具有一定的血管形成和組織修

3、復(fù)作用，但EEPC和EOC在血管的形成和受損組織修復(fù)的過程中具體發(fā)揮什么作用，與哪些信號(hào)通路和調(diào)控機(jī)制有關(guān)目前尚不清楚。
　　Notch信號(hào)途徑從胚胎發(fā)育到成年個(gè)體的多個(gè)系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用，對(duì)不同組織中的細(xì)胞命運(yùn)起著決定性作用。以往的研究提示 Notch信號(hào)途徑對(duì)EPC的定植、遷移和歸巢有重要作用，我們前期的實(shí)驗(yàn)也表明，小鼠肝臟部分切除后，EPC可以遷移至受損的肝臟組織參與肝組織的再生，但對(duì)EOC的影響未見報(bào)道。為了進(jìn)一步分析No

4、tch信號(hào)途徑對(duì)內(nèi)皮干/祖細(xì)胞的調(diào)控機(jī)制，我們研究Notch信號(hào)途徑對(duì)不同分化階段的EPC的調(diào)控作用，由于轉(zhuǎn)錄因子 RBP-J是Notch受體下游的關(guān)鍵效應(yīng)分子，可以介導(dǎo)四種Notch受體在核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄激活作用，因此是整個(gè)Notch信號(hào)途徑調(diào)控的匯集點(diǎn)。我們通過建立RBP-J條件性剔除小鼠，擬表達(dá)了Notch在多種組織中的缺失，研究結(jié)果顯示 Notch信號(hào)途徑在維持血管平衡和組織修復(fù)方面有重要的作用。
　　主要研究成果如下：

5、　　1．通過體外貼壁擴(kuò)增培養(yǎng)，從小鼠骨髓細(xì)胞中成功培養(yǎng)出 EEPC和EOC，表達(dá)CD34+/CD133+/VEGFR2+的EEPC數(shù)目從最初的0.08％能夠增長至50%以上；
　　2．我們發(fā)現(xiàn)，在三維管腔形成實(shí)驗(yàn)中，EEPC不能形成管腔樣結(jié)構(gòu)，而EOC能夠形成管腔樣結(jié)構(gòu)并且受到Notch-RBP-J信號(hào)通路的調(diào)控；阻斷Notch-RBP-J信號(hào)通路后，EEPC的增殖，遷移，CXCR4的表達(dá)均呈下降趨勢(shì)而EOC的增殖、遷移以及CXC

6、R4的表達(dá)呈上升趨勢(shì)。提示Notch信號(hào)通路對(duì)EEPC和EOC的調(diào)控不相同；
　　3．通過RBP-J條件性基因剔除小鼠模型，我們進(jìn)一步觀察到，小鼠肝大部切除術(shù)后（PHx），通過Notch信號(hào)通路的調(diào)控EEPC可以迅速募集到受損肝臟，促進(jìn)肝臟血管的重建、肝細(xì)胞的增殖以及肝功能的恢復(fù)，而EOC并沒有有效促進(jìn)肝臟的再生和肝細(xì)胞的增殖，提示 Notch-RBP-J信號(hào)通路在EEPC和EOC參與的肝再生進(jìn)程中的調(diào)控作用不同，并且發(fā)現(xiàn)EEPC

7、和EOC在肝再生過程中發(fā)揮著不同的作用。
　　綜上所述，我們通過 RBP-J剔除小鼠，觀察了Notch-RBP-J信號(hào)對(duì)于EEPC和EOC參與的肝再生進(jìn)程的調(diào)控作用。我們的結(jié)果表明，Notch信號(hào)參與調(diào)控EEPC和EOC對(duì)肝細(xì)胞的再生，肝臟的修復(fù)，以及肝功能的恢復(fù)，并且EEPC和EOC的增殖、分化和遷移受到Notch-RBP-J信號(hào)途徑的調(diào)控；EEPC和EOC在肝再生進(jìn)程中發(fā)揮著不同的作用。這些研究為進(jìn)一步了解內(nèi)皮干/祖細(xì)胞的功能