RESISTIN對炎癥信號(hào)途徑的調(diào)控研究.pdf

1、Resistin稱抗素(也稱FIZZ3),是一種含有114個(gè)氨基酸的細(xì)胞因子。近來發(fā)現(xiàn)resistin具有一系列前炎癥因子的特征,在炎癥中能夠誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子的表達(dá),從而導(dǎo)致白細(xì)胞向各個(gè)炎癥組織中的浸潤。盡管resistin在炎癥發(fā)生中已有不少報(bào)道,但其與經(jīng)典炎癥信號(hào)途徑的關(guān)系,在炎癥中的作用及其調(diào)控機(jī)制尚未闡明。
　　 環(huán)氧合酶2(COX-2)是前列腺素合成中的一個(gè)限速酶。在人體中存在兩種不同的COX異構(gòu)體,分別稱為C

2、OX-1和COX-2。其中COX-2是一種經(jīng)過誘導(dǎo)而產(chǎn)生的酶,在正常生理?xiàng)l件下維持較低的表達(dá)水平,但在炎癥部位表達(dá)上調(diào),催化炎性PGs的合成并誘發(fā)炎癥反應(yīng)。此外,COX-2的啟動(dòng)子上存在NF-kB的結(jié)合元件,可受轉(zhuǎn)錄因子NF-kB調(diào)控。一些重要的炎癥因子例如TNF-α和IL-1可通過激活NF-kB而上調(diào)COX-2的表達(dá)。
　　 本研究以resistin為研究對象,采用real-time PCR、Western Blotting和

3、細(xì)胞轉(zhuǎn)染等技術(shù),系統(tǒng)研究了resistin通過經(jīng)典的炎癥信號(hào)途徑上調(diào)COX-2的基因表達(dá)及抗炎肽C15對resistin等引起的炎癥反應(yīng)的抑制作用分子機(jī)制,結(jié)果如下:
　　 1.在巨噬細(xì)胞內(nèi)分別轉(zhuǎn)染豬和小鼠resistin的超表達(dá)載體,采用real-timePCR和Western Blotting方法檢測細(xì)胞內(nèi)源的COX-2的mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)變化。結(jié)果表明,resistin在RAW264.7巨噬細(xì)胞系中可以顯著地上調(diào)C

4、OX-2的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)。更重要的是,通過原核表達(dá)制備了抗resistin的抗體,用抗體處理可以抵消resistin的這種作用。
　　 2.以巨噬細(xì)胞為模型,通過負(fù)顯性IkBα突變體和PDTC這兩種抑制物質(zhì)研究了resistin對COX-2的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的調(diào)控。結(jié)果表明,無論是超表達(dá)負(fù)顯性Ird3α突變體載體,還是用抑制劑PDTC刺激,都可以抑制resistin對COX-2的誘導(dǎo)作用。進(jìn)一步的研究證實(shí),resistin的

5、超表達(dá)可以上調(diào)NF-kB分子中的p65亞基的表達(dá),進(jìn)而誘導(dǎo)COX-2的表達(dá)水平的上升。
　　 3.以resistin對小鼠巨噬細(xì)胞作不同時(shí)間梯度的處理,用Western Blotting方法分析resistin對一種MAPKKK激酶TAK1(Transforming growth factorβactivatedkinase1)的磷酸化程度的影響。結(jié)果表明,resistin可以顯著上調(diào)TAK1的磷酸化水平。
　　 4.以

6、促炎物質(zhì)resistin,LPS,PA分別和C15共同處理小鼠巨噬細(xì)胞,檢測炎癥基因COX-2和iNOS(inducible nitric oxide synthase)的表達(dá)變化。結(jié)果表明,炎癥基因COX-2和iNOS可以被三種促炎物質(zhì)誘導(dǎo)表達(dá),并且這種誘導(dǎo)的情況可以顯著被C15所抑制住。
　　 5.在巨噬細(xì)胞中,以LPS在不同時(shí)間梯度刺激細(xì)胞,用細(xì)胞免疫熒光的方法檢測NF-kB的p65亞基的入核情況。結(jié)果證實(shí),C15可以明顯