羊口瘡病毒陜西株B2L基因的克隆表達(dá)及間接ELISA檢測(cè)方法的建立.pdf

1、羊口瘡(Orf)是由羊口瘡病毒(Orfvirus，ORFV)引起的傳染性很強(qiáng)的傳染病，呈全球性分布，羔羊?qū)Ρ静≥^為敏感，常造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。本試驗(yàn)應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)擴(kuò)增了ORFV Shaanxi分離株的B2L基因，并對(duì)其進(jìn)行了序列分析及原核表達(dá)，對(duì)表達(dá)的重組蛋白進(jìn)行純化，并以該重組蛋白為包被抗原，通過(guò)優(yōu)化各種條件，初步建立了檢測(cè)其抗體水平間接ELISA方法。獲得如下研究結(jié)果:
　　1.擴(kuò)增了ORFV Shaanxi分

2、離株的B2L基因，目的基因片段長(zhǎng)度為1137bp，測(cè)序后，與GenBank中已收錄的其他11株病毒毒株的B2L蛋白進(jìn)行了序列分析，核苷酸序列和氨基酸序列的相似性在95.9％～97.4％和97.8％～99％之間。將目的基因成功連接到原核表達(dá)載體pET-28a，構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET-28a-B2L。在大腸埃希菌原核表達(dá)系統(tǒng)中對(duì)重組質(zhì)粒pET-28a-B2L進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，獲得了42kD的B2L重組蛋白。
　　2.以純化的B2L重組蛋白為