仙臺(tái)病毒F基因的表達(dá)與間接ELISA檢測(cè)方法的建立和應(yīng)用.pdf

1、仙臺(tái)病毒(Sendai virus，SeV)屬于副粘病毒科副粘病毒屬，是一個(gè)單股負(fù)鏈RNA病毒，小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠和豚鼠等嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均易感。仙臺(tái)病毒傳染性強(qiáng)、易擴(kuò)散，一般呈隱性感染，是嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物最難控制的病毒之一，鼠群感染仙臺(tái)病毒后會(huì)改變體內(nèi)細(xì)胞免疫反應(yīng)，干擾試驗(yàn)結(jié)果，因此建立快速診斷方法十分必要。 目前，檢測(cè)仙臺(tái)病毒主要用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)仙臺(tái)病毒抗體，SeV可以在LICMK2和BHK21細(xì)胞上生長(zhǎng)，但很難

2、獲得高滴度的病毒，雞胚培養(yǎng)雖然能獲得高滴度的病毒，但純化的病毒粒子保留有雞胚蛋白，干擾檢測(cè)的特異性。本研究利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)pQE31表達(dá)仙臺(tái)病毒F蛋白高抗原部分FP(S)，用純化的融合蛋白作為包被抗原建立ELISA方法，可用于仙臺(tái)病毒血清抗體的快速檢測(cè)。 1、仙臺(tái)病毒FP(S)基因的克隆、表達(dá)及抗原制備 根據(jù)已發(fā)表的SeV(gi：9627219) F基因序列設(shè)計(jì)特異性引物，以逆轉(zhuǎn)錄的仙臺(tái)病毒cDNA為模板，用RT-P

3、CR方法擴(kuò)增出F基因高抗原性片段FP(S)，將其插入到pMD18.T載體中測(cè)序鑒定后，測(cè)序正確的FP(S)基因片段克隆入pQE31原核表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌M15，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，純化重組蛋白FP(S)。用SDS-PAGE和Western-blot對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明，表達(dá)的融合蛋白FP(S)分子量為26kD，與預(yù)期大小相符，能與SeV陽(yáng)性血清發(fā)生特異性反應(yīng)，說(shuō)明FP(S)有很高的抗原性，可以作為檢測(cè)仙臺(tái)病毒血清抗體的抗原。