PLA2、PAF在大鼠羊水栓塞發(fā)病機(jī)制中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分:
　　目的:大鼠羊水栓塞模型制備、鑒定和外周血液動力學(xué)改變。
　　方法:健康懷孕大鼠30只,根據(jù)注入液體性質(zhì)不同隨機(jī)分為生理鹽水組(對照組)、羊水原液組(實(shí)驗(yàn)組1)、混合上清液組(實(shí)驗(yàn)組2),每組10只。麻醉生效后,大鼠行子宮次全切除術(shù),關(guān)腹,分離左頸總動脈,左頸總動脈插管并接通三通管連接于二通道生理記錄儀。三組經(jīng)腹腔靜脈分別注入生理鹽水、羊水原液、羊水胎糞混合離心上清液,連續(xù)監(jiān)測血液動力學(xué)指標(biāo),注入后60min未

2、死亡的用10％KCl處死,取出大鼠右肺固定包埋石蠟切片做HE染色與APM染色查找羊水成分,IHC檢測肺組織血管內(nèi)CK10表達(dá),外周血液動力學(xué)數(shù)據(jù)用重復(fù)測量的方差分析,不同時(shí)間點(diǎn)和組間比較用LSD法進(jìn)行多重比較,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.對照組無一例死亡,實(shí)驗(yàn)組1可見大鼠呼吸急促、躁動、四肢青紫、鼻尖濕冷、小便失禁、60min內(nèi)無死亡,實(shí)驗(yàn)組1癥狀較實(shí)驗(yàn)組2重,60min內(nèi)有一例死亡。
　　2.三組

3、孕鼠外周血液動力學(xué)結(jié)果:對照組血液動力學(xué)指標(biāo)有一過性改變,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2與對照組動脈收縮壓、舒張壓及平均動脈壓相比有明顯下降(P<0.05),以注入羊水后10min最為明顯,30min至60min基線維持低水平狀態(tài),實(shí)驗(yàn)組2中有一只孕鼠出現(xiàn)平均動脈血壓持續(xù)性下降后死亡,實(shí)驗(yàn)組1與實(shí)驗(yàn)組2之間差異不明顯,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),三組孕鼠心率改變差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.HE切

4、片染色示實(shí)驗(yàn)組1與實(shí)驗(yàn)組2大鼠肺組織不同程度水腫,大量炎性細(xì)胞浸潤,肺小血管可見淡藍(lán)色羊水粘液及角化鱗狀上皮等羊水有形成分,實(shí)驗(yàn)組2肺損傷較重,對照組未見明顯改變。
　　4.APM切片染色示實(shí)驗(yàn)組1與實(shí)驗(yàn)組2大鼠肺血管里角化鱗狀上皮呈桃紅色、管腔中粘液呈藍(lán)色、中性粒細(xì)胞胞質(zhì)呈淡藍(lán)或無色,核呈紅色,對照組未見。
　　5.CK10免疫組化染色切片觀察到實(shí)驗(yàn)組1與實(shí)驗(yàn)組2在大鼠肺血管可見呈棕黃色、絲狀角化的鱗狀上皮,對照組未見。<

5、br>　　結(jié)論:
　　1.大鼠是構(gòu)建羊水栓塞比較合適的動物,經(jīng)濟(jì)、實(shí)用,值得在羊水栓塞實(shí)驗(yàn)室的研究中推薦。
　　2.羊水栓塞發(fā)生時(shí)最先觀察到的體征可能是外周血液動力學(xué)指標(biāo)的變化。
　　3. APM染色、HE染色、CK10染色結(jié)果證實(shí)羊水栓塞的動物模型建立成功。
　　第二部分:
　　目的:研究sPLA2、PAF在大鼠羊水栓塞后的變化及病理作用,觀察肺組織中cPLA2的表達(dá),檢測胎糞和羊水中的sPLA2、PAF

6、濃度,為進(jìn)一步探討羊水栓塞發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　方法:羊水栓塞動物模型制備好后,分別在實(shí)驗(yàn)前后60min從大鼠左頸總動脈插管處取血1ml,酶聯(lián)免疫檢測血清、羊水原液和混合液中sPLA2、PAF濃度,取出大鼠右肺IHC檢測肺組織中cPLA2的表達(dá)。所有數(shù)據(jù)使用SPSS19.0處理, sPLA2、PAF值采用配對t檢驗(yàn)、協(xié)方差分析及相關(guān)回歸分析。P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.三組孕鼠實(shí)驗(yàn)前后血清 s

7、PLA2濃度:對照組實(shí)驗(yàn)前(747.62±74.01)ng/L,實(shí)驗(yàn)后(769.91±95.42) ng/L;實(shí)驗(yàn)組1實(shí)驗(yàn)前(733.20±76.50) ng/L,實(shí)驗(yàn)后(1007.72±107.04) ng/L;實(shí)驗(yàn)組2實(shí)驗(yàn)前(721.96±113.21) ng/L,實(shí)驗(yàn)后(1189.87±264.82)ng/L。
　　2.三組孕鼠實(shí)驗(yàn)前后血清PAF濃度:對照組實(shí)驗(yàn)前(28.94±4.34)ug/L,實(shí)驗(yàn)后(30.16±4.95

8、)ug/L;實(shí)驗(yàn)組1實(shí)驗(yàn)前(30.45±8.10)ug/L,實(shí)驗(yàn)后(38.93±9.12)ug/L;實(shí)驗(yàn)組2實(shí)驗(yàn)前(28.37±5.79)ug/L,實(shí)驗(yàn)后(43.60±9.29)ug/L。
　　3.實(shí)驗(yàn)組孕鼠血清 sPLA2、PAF濃度相關(guān)性檢驗(yàn):實(shí)驗(yàn)前孕鼠血清 sPLA2、PAF濃度經(jīng)檢驗(yàn)兩者無相關(guān)性(P=0.834 R=0.045),實(shí)驗(yàn)后孕鼠血清sPLA2、PAF濃度之間呈正相關(guān)(P=0.006 R=0.548)。
　

9、　4.大鼠羊水和胎糞中sPLA2和PAF濃度:羊水原液sPLA2濃度約為626.42 ng/L,1%~7%混合上清液sPLA2濃度約為999.24ng/L;羊水原液PAF濃度約為29 ug/L,1%~7%混合上清液PAF濃度約為35.56 ug/L。
　　5.實(shí)驗(yàn)組1與實(shí)驗(yàn)組2 cPLA2免疫組化示大鼠支氣管上皮細(xì)胞和中性粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞胞漿強(qiáng)陽性表達(dá),對照組僅見少量表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.實(shí)驗(yàn)組2比