家兔延髓腹側(cè)呼吸組中段疑核內(nèi)P2X受體在機(jī)體低氧呼吸反應(yīng)中的作用.pdf

1、目的：(1)觀察向家兔NA內(nèi)微量注射P2X受體內(nèi)源激動(dòng)劑ATP，P2X受體拮抗劑PPADS(pyridoxal-5'-phosphate-6'-azopheny1-2'，4'-disulphonic acid)對(duì)常氧呼吸和低氧呼吸反應(yīng)的影響，探討P2X受體在低氧呼吸反應(yīng)中的作用；(2)進(jìn)一步應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法，觀察P2X受體在NA內(nèi)表達(dá)的數(shù)量變化，探索P2X受體在介導(dǎo)低氧呼吸中的作用及其可能的機(jī)制。 方法： 1.電生

2、理學(xué)實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)在麻醉、肌松、人工通氣的成年家兔上進(jìn)行。常氧通氣為醫(yī)用空氣(20％O2-80％N2)，低氧通氣為10％O2-90％N2混合氣體。以膈神經(jīng)放電為呼吸觀察指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)在56只健康成年家兔上進(jìn)行，通過解剖定位和引導(dǎo)呼吸神經(jīng)元放電定位NA。微量注射：向NA內(nèi)微量注射P2X受體內(nèi)源激動(dòng)劑ATP，觀察注射前后，常氧和低氧通氣對(duì)膈神經(jīng)放電以及動(dòng)脈血pH值的變化；為了檢驗(yàn)向NA內(nèi)注射ATP引起的呼吸效應(yīng)是否呈現(xiàn)劑量依賴性，向NA內(nèi)注射4個(gè)劑

3、量的ATP(0.1，0.3，0.5，0.7μl)。每次注射之間至少間隔l小時(shí)；向NA內(nèi)微量注射廣譜P2X受體拮抗劑PPADS(吡多醛衍生物)，5分鐘后在同一位點(diǎn)注射ATP0.3μl，觀察注射前后常氧和低氧通氣對(duì)膈神經(jīng)放電的影響。 2.免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)：健康成年家兔32只，隨機(jī)分為4組：A組(n=8)：注射生理鹽水；B組(n=8)：注射ATP；C組(n=8)：注射PPADS；D組(n=8)：不注射。A、B、C組動(dòng)物急性缺氧后快速處

4、死，D組動(dòng)物直接處死，迅速取出腦干，以1096福爾馬林PBS溶液浸泡固定腦組織。石蠟包埋后進(jìn)行切片。采用免疫組織化學(xué)方法SP法觀察P2X受體在NA內(nèi)的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1.電生理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：低氧通氣開始后，動(dòng)物膈神經(jīng)放電幅度和呼吸頻率迅速增加，在低氧通氣2分鐘左右時(shí)達(dá)到高峰，隨后有逐漸衰減的趨勢(shì)，但在整個(gè)5分鐘的低氧通氣過程中，始終高于常氧通氣狀態(tài)下的放電幅度和呼吸頻率；向NA內(nèi)微量注射ATP對(duì)常氧通氣下的膈神經(jīng)放電沒

5、有明顯影響，但能顯著性增強(qiáng)膈神經(jīng)放電對(duì)低氧呼吸的反應(yīng)以及降低動(dòng)脈血pH值；4種劑量的ATP在NA內(nèi)引起的呼吸興奮效應(yīng)呈現(xiàn)顯著的劑量依賴性，微量注射大劑量ATP對(duì)膈神經(jīng)放電的興奮效應(yīng)明顯大于小劑量ATP；向NA內(nèi)微量注射PPADS對(duì)常氧通氣下的膈神經(jīng)放電沒有明顯影響但削弱ATP引起的低氧呼吸反應(yīng)。 2.免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)：(1)各組均在NA處觀察到P2X受體的表達(dá)。(2)統(tǒng)計(jì)分析顯示低氧通氣組動(dòng)物P2X受體數(shù)目比常氧組顯著增多，即A

6、、B、C三組P2X受體數(shù)目比D組表達(dá)明顯增加(P<0.01)。 結(jié)論：在常氧通氣即生理狀態(tài)下，腦干NA的P2X受體在呼吸調(diào)控中無明顯作用，但均參與了低氧呼吸反應(yīng)的形成，增強(qiáng)低氧呼吸反應(yīng)，而P2X受體阻斷劑PPADS削弱ATP引起的低氧呼吸反應(yīng)效應(yīng)。 在免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，P2X受體在家兔NA中有表達(dá)，且在低氧通氣后表達(dá)顯著增強(qiáng)。 意義：P2X受體在低氧通氣后的家兔延髓NA區(qū)的明顯表達(dá)，為ATP對(duì)呼吸節(jié)律的調(diào)節(jié)