呼吸道合胞病毒感染患兒外周血單個核細胞P2X7受體表達.pdf

1、目的：
　　通過使用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)（RT-PCR）檢測呼吸道合胞病毒感染患兒喘息組與無喘息組（對照組）外周血單個核細胞P2X7受體表達的情況，探討兒童呼吸道合胞病毒感染后，P2X7受體表達在喘息患兒與無喘息癥狀患兒之間是否有差異及其意義。
　　對象：
　　選取2014年6月至2015年3月于長治市人民醫(yī)院3月齡至3歲住院患兒，病例均符合第七版《兒科學(xué)》小兒呼吸系統(tǒng)疾病（支氣管哮喘除外）診斷標準，排除心源性哮喘、百日

2、咳、支氣管異物等原因引起的喘息。所選患兒入組前近兩周內(nèi)均未使用過糖皮質(zhì)激素。實驗中使用直接免疫熒光法檢測RSV抗原。將符合條件的患兒根據(jù)有無明顯喘息分為兩組，每組各有30名，分別記錄各患兒年齡、性別，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析喘息組與無喘息組無區(qū)別。
　　材料和方法：
　　選擇呼吸道合胞病毒陽性喘息患兒與無喘息癥狀患兒各30例，采集入組患兒新鮮外周靜脈血，用外周血淋巴細胞提取液提取分離外周血淋巴細胞，采用經(jīng)典方法提取細胞RNA，檢測提取結(jié)

3、果并對RNA濃度進行檢測，按照PrimeScript TMⅡ1st Strand cDNA Synthes說明書進行逆轉(zhuǎn)錄合成反應(yīng)，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后樣本進行PCR反應(yīng)，為提高實驗準確性，以β-Actin為內(nèi)參照，引物基因序列由Primer5.0軟件設(shè)計。
　　實驗結(jié)果：
　　經(jīng)RT-PCR法得到擴增產(chǎn)物，產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)攝圖，分別記錄兩組患兒中P2X7受體基因mRNA表達的灰度值，記錄內(nèi)參照基因mRNA表達的

4、灰度值，以內(nèi)參照與喘息組或無喘息組灰度值的比值代表P2X7受體基因mRNA的表達。統(tǒng)計描述，喘息組患兒P2X7受體mRNA表達水平為1.19±0.35，而對照組P2X7受體mRNA表達水平為0.56±0.15，喘息組與無喘息組間比較采用F檢驗，以α＝0.05為檢驗水準，兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　研究結(jié)論：
　　1、呼吸道合胞病毒感染患兒喘息組與對照組比較P2X7受體表達增高；
　　2、P2X7受體參與兒童呼吸道合胞