新基因HA117在腫瘤細(xì)胞株及裸鼠體內(nèi)的耐藥功能研究.pdf

1、重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文新基因HA117在腫瘤細(xì)胞株及裸鼠體內(nèi)的耐藥功能研究姓名：鄭改煥申請學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：兒科學(xué)（血液腫瘤）指導(dǎo)教師：徐酉華20090501重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文pSESHUSHAi5導(dǎo)入腺病毒同源骨架質(zhì)粒BJ—Adeasy中產(chǎn)生腺病毒質(zhì)粒AdeasyHAi5，脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將AdeasyHAi5轉(zhuǎn)染入產(chǎn)病毒包裝細(xì)胞旺K293，通過乒乓感染收獲高滴度HAl17基因的RNA干擾重組腺病毒Ad—HAi5。3通

2、過基因轉(zhuǎn)染研究HAll7基因?qū)aji、CW2細(xì)胞株耐藥性的影響。Raji細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分3組：實(shí)驗(yàn)組(轉(zhuǎn)染HAll7基因的Rail／HAll7細(xì)胞)，RNA干擾組(轉(zhuǎn)染HAll7基因及其RNA干擾載體的Raji／HAl17／HAi細(xì)胞)，空白對照組(未轉(zhuǎn)染的Raji細(xì)胞)；CW2細(xì)胞分組同Raji。采用脂質(zhì)體介導(dǎo)重組質(zhì)粒及重組腺病毒直接感染的方法分別對Raji細(xì)胞和CW2細(xì)胞進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染。用熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染率，RTPC

3、R檢測各組細(xì)胞HAll7基因表達(dá)，MTT檢測各組細(xì)胞對柔紅霉素(DNR)、阿霉素(ADM)、甲氨喋呤(CTX)、長春新堿(VCR)及’5一氟尿嘧啶(5FU)的敏感性。用AnnexinVFITC和碘化丙啶(PI)雙染結(jié)合流式細(xì)胞儀的方法檢測各組CW2細(xì)胞的凋亡率。4通過建立裸鼠結(jié)腸癌皮下移植瘤模型對HAll7基因的耐藥功進(jìn)行裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。在Balb／c裸鼠皮下接種具有HAll7耐藥性的CT26細(xì)胞懸液，建立Balb／c裸鼠結(jié)腸癌皮下移