丙戊酸在肺癌耐藥細胞株中的作用及機理初步探討.pdf

1、目的：本實驗利用VPA(丙戊酸)作用于A549/DDP細胞，研究V PA在體外條件下對人肺腺癌A549/DDP細胞的增殖和凋亡的影響，通過對Bcl-2，P-gp，NF-kBP65，Caspase-3測定，來探討其作用機理。 方法：采用體外細胞培養(yǎng)，設(shè)對照組(單細胞懸液)、實驗1組(單細胞懸液+1mmol/L VPA處理)、實驗2組(單細胞懸液+2 mmol/L VPA處理)、實驗3組(單細胞懸液+4 mmol/L VPA處理)，

2、以噻唑藍(MTT)比色試驗為指標，觀察VPA對人肺腺癌A549/DDP細胞的增殖;用流式細胞儀測定細胞周期動力學(xué)變化;用免疫細胞化學(xué)方法檢測Bcl-2，P-gp，P65，Caspase-3。 結(jié)果: (1)倒置顯微鏡下觀察:對照組細胞生長旺盛，呈叢簇狀排列，細胞長梭形或多邊形，細胞形態(tài)飽滿，胞質(zhì)豐富，胞核居于細胞中央;實驗組當(dāng)用藥濃度為1mmol/L時，細胞生長未見明顯抑制，2mmol/L以上隨藥物濃度增加，貼壁的正常細

3、胞數(shù)逐漸減少，這些細胞多散在或呈小堆排列，細胞皺縮呈圓形或卵圓形，胞質(zhì)皺縮。 (2)VPA濃度為4mmol/L時，對A549/DDP細胞體外生長均有明顯的抑制作用。作用48小時，細胞抑制率分別為12.98％、20.02％、24.72％，呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關(guān)系。在同一藥物濃度下，細胞抑制率隨作用時間的延長呈增加趨勢;同一作用時間，細胞抑制率隨藥物濃度的增加呈增加趨勢。 (3)VPA處理24h后開始出現(xiàn)細胞周期阻滯，隨濃度增

4、加，G1期細胞百分率增加，同時伴隨S期細胞百分率減少。 (4)免疫細胞化學(xué)顯示： ①相對于對照組，實驗各組凋亡分子Caspase-3表達明顯增加(分別為14.67±4.22、34.00±5.03、45.07±4.71)％：對照組(5.75±2.89)％；兩者之間比較有顯著差異(p<0.05)，且各實驗組之間差異明顯。 ②實驗組NF-κBP65表達(34.4±2.81、52.2±3.20、63.1±2.80)％；對

5、照組表達(75.2±5.19)％，兩者之間比較有顯著差異(p<0.001)且各實驗組之間差異明顯。 ③實驗各組Bcl-2表達(25.60±2.08、19.87±1.03、15.38±0.45)％：對照組表達為(42.67±1.38)％；各組之間比較顯著差異(p<0.05)。 ④實驗組P-gp表達(40.98±0.51，31.07±0.90，30.77±1.21)％，對照組為(42.15±0.15)％：實驗組2，3與對照組

6、相比p<0.05。 結(jié)論： (1)VPA對體外培養(yǎng)的人肺腺癌A549/DDP細胞生長有明顯的抑制作用。 (2)VPA對人肺腺癌A549/DDP細胞的生長有抑制作用，通過誘導(dǎo)細胞周期G1阻滯，且能增加Caspase-3陽性細胞表達從而可能誘導(dǎo)細胞凋亡。 (3)通過對NF-κBP65測定，證實使用VPA造成NF-κB在胞質(zhì)中的降解；進一步對NF-κB信號系統(tǒng)的下游因子Bcl-2測定，發(fā)現(xiàn)對照組與各實驗濃度組之