生長抑素類似物對非小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞株靶向治療作用的實驗研究.pdf

1、目的：探討生長抑素類似物奧曲肽在體外對人非小細(xì)胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)細(xì)胞的抑制作用及奧曲肽對NSCLC化療是否具有增敏作用，并研究其可能的機(jī)制；通過三種不同方式建立對紫杉醇耐藥的非小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞系，并探討其耐藥機(jī)制；合成奧曲肽紫杉醇耦連物并研究其由生長抑素受體(somatostatin receptor，SSTR)介導(dǎo)的對NSCLC耐藥細(xì)胞株的靶向治療作用。 方法：RT-PC

2、R檢測非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549和H157 SSTR 1-5mRNA的表達(dá)；檢測不同時間和濃度梯度的奧曲肽對兩細(xì)胞株的抑制率；光鏡下觀測奧曲肽作用后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；MTT法檢測奧曲肽與紫杉醇對兩細(xì)胞株是否具有協(xié)同作用；采用流式細(xì)胞儀檢測奧曲肽、紫杉醇以及兩者聯(lián)合作用時A549細(xì)胞的凋亡率：熒光實時定量PCR檢測奧曲肽作用后細(xì)胞多藥耐藥相關(guān)基因的改變。 分別采用紫杉醇大劑量沖擊誘導(dǎo)法、大劑量沖擊序貫小劑量誘導(dǎo)法和小劑量逐步誘導(dǎo)法

3、分別誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549，建立非小細(xì)胞肺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株A549-P、A549-PS和A549-S；倒置顯微鏡觀察并記錄細(xì)胞形態(tài)；細(xì)胞計數(shù)法觀測細(xì)胞增值規(guī)律；MTT法計算IC50和RI；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布；MTT法檢測耐藥細(xì)胞系的多藥耐藥性；實時定量PCR檢測多藥耐藥相關(guān)基因：MDR-1、MRP-1、BCRP等mRNA的相對表達(dá)量。 采用液相有機(jī)合成的方法，合成奧曲肽紫杉醇耦連物；并采用MTT法研究其對A54

4、9及其耐藥細(xì)胞株的靶向治療作用。 結(jié)果：A549細(xì)胞檢測到SSTRl～SSTR5 mRNA的表達(dá)，而H157細(xì)胞除有SSTR1和SSTR4 mRNA的表達(dá)外，其他受體均未檢測到mRNA的表達(dá)。奧曲肽對A549細(xì)胞增殖具有抑制作用并具有時間(24h、48h、72h)和濃度(1～1000nmol/L)依賴性，在光鏡下可觀測到細(xì)胞細(xì)胞受損傷的形態(tài)學(xué)改變；而對H157細(xì)胞無抑制作用。對于A549細(xì)胞，125、250、500nmol/L，

5、奧曲肽作用48h可明顯增加其對化療的敏感性(P<0.01)；并能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，但未增加與紫杉醇聯(lián)合作用后細(xì)胞的凋亡率；而對H157細(xì)胞，奧曲肽未發(fā)現(xiàn)化療增敏作用。奧曲肽可下調(diào)A549細(xì)胞多藥耐藥相關(guān)基因MDR-1、MRP-1的表達(dá)(P<0.05，P<0.01)，而對H157細(xì)胞多藥耐藥相關(guān)基因的表達(dá)無影響。 成功建立了A549-P、A549-PS和A549-S三種非小細(xì)胞肺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞系，其耐藥指數(shù)分別為6.48、77.84

6、和9.98，并伴有細(xì)胞形態(tài)、生長增殖和細(xì)胞周期的改變；A549-S的MDR-1、MRP-1、BCRP均有不同程度的升高；A549-PS的MDR-1和A549/P的MRP-1也升高，而其他耐藥基因則下調(diào)。 成功得到了紫杉醇中間體(PTX-L)，以及奧曲肽紫杉醇耦連物PTX-OCT和2PTX-OCT；奧曲肽紫杉醇耦連物PTX-OCT、2PTX-OCT對三種耐藥細(xì)胞株的作用強(qiáng)于PTX，特別是對于A549-S耐藥細(xì)胞株。 結(jié)論：