生長抑素及其受體對人非小細(xì)胞肺癌靶向治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，非小細(xì)胞肺癌(non．small cell lung cancer，NSCLC)約占全部肺癌的80﹪，許多患者確診時(shí)就失去手術(shù)機(jī)會。靶向治療是當(dāng)前肺癌研究的熱點(diǎn)。目前，多肽類受體作為惡性腫瘤診斷和治療的分子靶點(diǎn)已成為研究的熱點(diǎn)，生長抑素受體(somatostatin receptor，SSTR)是其中的典型代表。SSTR在人非小細(xì)胞肺癌的表達(dá)明顯高于正常組織。非小細(xì)胞肺癌病人SSTR放射顯像陽性率很高(75～

2、100﹪)，這為非小細(xì)胞肺癌病人SSTR靶向治療提供了可能。 紫杉醇(paclitaxel，PTX)具有廣泛的抗腫瘤活性，目前已成為包括非小細(xì)胞肺癌在內(nèi)的多種腫瘤的一線化療藥物。然而同其他化療藥物一樣，紫杉醇對人體具有許多的不良反應(yīng)，其中包括骨髓抑制、神經(jīng)毒性等。奧曲肽是生長抑素的八肽類似物，與SSTR2、3、5具有較強(qiáng)的結(jié)合力。將紫杉醇與生長抑素類似物奧曲肽連接，通過奧曲肽與腫瘤細(xì)胞表面SSTR的結(jié)合，在對腫瘤起到靶向治療作用

3、的同時(shí)，也可以減輕對人體的毒副作用。固相有機(jī)化學(xué)的發(fā)展，使紫杉醇與奧曲肽的耦連變成現(xiàn)實(shí)。最近我們合成了一系列的紫杉醇一奧曲肽耦連藥物，其對人非小細(xì)胞肺癌的靶向治療作用需要實(shí)驗(yàn)證實(shí)。 SSTR．亞型的表達(dá)受到多種因素的影響，包括糖皮質(zhì)激素、雌激素、甲狀腺素、胰島素、睪丸酮等。研究表明，SSTR的表達(dá)與孕激素受體(progesteronereceptor，：PR)的表達(dá)正相關(guān)，孕激素可能有上調(diào)SSTR的作用。 孕激素與PR結(jié)

4、合后，可以通過多種途徑抑制細(xì)胞生長。生長抑素也可以通過直接作用和間接作用產(chǎn)生抗腫瘤作用。研究孕激素對SSTR表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，以及生長抑素聯(lián)合孕激素對人非小細(xì)胞肺癌的治療作用，將會在非小細(xì)胞肺癌的生物學(xué)治療中起到重要的作用。 目的：評價(jià)紫杉醇.奧曲肽耦連物對人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549和Calu-6細(xì)胞的毒性和靶向性；探討孕激素調(diào)節(jié)SSTR在人非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)，以及聯(lián)合應(yīng)用孕激素與生長抑素對人非小細(xì)胞肺癌的治療作用。探索生長抑

5、素及其受體在人非小細(xì)胞肺癌靶向治療中的作用。 方法：RT-PCR法檢測A549和Calu-6細(xì)胞中SSTR的表達(dá)，檢測人成纖維細(xì)胞SSTR的表達(dá)；以人成纖維細(xì)胞作為陰性對照細(xì)胞株，MTT-法檢測紫杉醇.奧曲肽耦連藥物對A549和Calu-6細(xì)胞及人成纖維細(xì)胞的毒性；流式細(xì)胞儀檢測耦連藥物作用后A549細(xì)胞的細(xì)胞周期變化；免疫組化法檢測A549細(xì)胞中PR的表達(dá)；RT-PCR檢測孕激素作用后A549細(xì)胞中SSTR亞型mRNA的表達(dá)；

6、MTT法檢測孕酮與奧曲肽聯(lián)合應(yīng)用后A549細(xì)胞的生存率。 結(jié)果：人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549和Calu-6均表達(dá)SSTR0、SSTR2、SSTR4和SSTR5；其中A549細(xì)胞高表達(dá)SSTR2；Calu-6細(xì)胞高表達(dá)SSTR5。人成纖維細(xì)胞不表達(dá)SSTR。 紫杉醇-奧曲肽耦連藥物對A549和Calu-6細(xì)胞的毒性作用具有濃度依賴性和時(shí)間依賴性，耦連藥物細(xì)胞毒性同紫杉醇相似，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。10倍濃度奧曲肽降低耦連藥物對A5

7、49細(xì)胞的細(xì)胞毒性，增強(qiáng)紫杉醇對A549細(xì)胞的毒性作用。 紫杉醇-奧曲肽耦連藥物對人成纖維細(xì)胞的細(xì)胞毒性較紫杉醇弱，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。1 μmol/L紫杉醇、PTX-OCT、2PTX-OCT作用24 h后，人成纖維細(xì)胞細(xì)胞生存率分別為64.7±8.6﹪、86.1±1.8﹪和90±5.6﹪。 流式細(xì)胞儀分析藥物作用后.A549細(xì)胞的細(xì)胞周期，1 μmol/L紫杉醇、PTX-OCT和2PTX-OCT作用24 h后，A549細(xì)胞

8、G<,2>/M期的比率分別為44.9﹪、55.8﹪、75.4﹪，對照組中G<,2>/M期的比率為13.4﹪。 A549細(xì)胞表達(dá)PR；孕酮上調(diào)SSTR亞型在A549細(xì)胞中的表達(dá)。這種調(diào)節(jié)作用具有亞型特異性，與藥物作用時(shí)間及藥物濃度相關(guān)。0.1 mol/L孕酮處理A549細(xì)胞24 h，SSTR各亞型的表達(dá)普遍上調(diào)(p<0.05)，未發(fā)現(xiàn)SSTR3的表達(dá)；增加孕酮濃度為10 nmol/L，SSTR5表達(dá)繼續(xù)上調(diào)(p=0.001)，且出

9、現(xiàn)SSTR3的表達(dá)；繼續(xù)增加藥物濃度至1 μmol/L，SSTR各亞型表達(dá)變化不明顯。延長10nmol/L孕酮作用時(shí)間至48 h，SSTR3、SSTR5的表達(dá)繼續(xù)上調(diào)(p=0.012，p=0.02)；其他SSTR亞型的表達(dá)均有上調(diào)趨勢。單藥孕酮和奧曲肽均可抑制A549細(xì)胞的生長；聯(lián)合應(yīng)用孕酮與奧曲肽，A549細(xì)胞的生存率進(jìn)一步下降。析因分析表明，聯(lián)合用藥后孕酮與奧曲肽之間存在著交互作用(p=0.015)，聯(lián)合應(yīng)用孕酮和奧曲肽比單用兩藥對

10、A549細(xì)胞的抑制作用更強(qiáng)(p<0.05)。 結(jié)論： 1.人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549和Calu-6表達(dá)SSTR亞型mRNA。 2.紫杉醇.奧曲肽耦連物對于表達(dá)SSTR的腫瘤細(xì)胞具有與紫杉醇相似的抗腫瘤活性；對SSTR低表達(dá)或不表達(dá)的細(xì)胞具有更弱的毒性。紫杉醇一奧曲肽有希望作為一種新的靶向藥物來治療非小細(xì)胞肺癌。 3.孕酮上調(diào)A549細(xì)胞中SSTR各亞型mRNA的表達(dá)。 4.孕酮聯(lián)合奧曲肽對A549