HA117對先天性腸無神經(jīng)節(jié)細(xì)胞癥發(fā)病影響的探討.pdf

1、第一節(jié)神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因DPF3、Smarcd3及MEF2在先天性腸無神經(jīng)節(jié)細(xì)胞癥患兒腸道組織內(nèi)的表達(dá)情況
　　目的：通過對DPF3、Smarcd3及MEF2基因在先天性腸無神經(jīng)節(jié)細(xì)胞癥（HD）患兒腸道組織內(nèi)的檢測，驗證DPF3、Smarcd3及MEF2基因在腸道組織內(nèi)的表達(dá)情況，并探討DPF3、Smarcd3及MEF2基因在HD發(fā)病過程中的可能作用。
　　方法：隨機(jī)選取28例重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院HD患兒手術(shù)標(biāo)本，并根據(jù)手

2、術(shù)標(biāo)本取材的位置分為：痙攣段組和吻合口組。利用RealTime-PCR、免疫蛋白印跡法及免疫組織化學(xué)染色法從RNA和蛋白水平對DPF3、Smarcd3及MEF2基因在HD患兒腸道組織內(nèi)的表達(dá)進(jìn)行檢測，驗證DPF3、Smarcd3及MEF2在腸道組織內(nèi)的表達(dá)，并分析其參與HD發(fā)病過程的可能機(jī)制。其中，利用BIO-RAD對mRNA數(shù)據(jù)半定量分析；GeneSnap系統(tǒng)及軟件對蛋白數(shù)據(jù)進(jìn)行分析；免疫組織化學(xué)法及光學(xué)顯微鏡數(shù)碼攝片進(jìn)行蛋白染色分析

3、；GraphPad Prism5繪圖，SPSS（version17.0）進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。
　　結(jié)果：DPF3 mRNA在患兒吻合口和痙攣段的表達(dá)為1.76±1.30和1.07±0.93；蛋白的表達(dá)分別為2.31±0.62和1.95±0.57。Smarcd3 mRNA在患兒吻合口和痙攣段的表達(dá)為0.68±0.62和0.38±0.42；蛋白的表達(dá)分別為0.85±0.43和0.61±0.34；MEF2 mRNA在患兒吻合口和痙攣段的表達(dá)為

4、1.01±0.63和0.68±0.39；蛋白的表達(dá)分別為2.29±0.38和1.83±0.76。DPF3、Smarcd3及MEF2 mRNA及蛋白在患兒痙攣段的表達(dá)較吻合口均降低（P<0.05），且趨勢相一致。DPF3、Smarcd3及MEF2在吻合口神經(jīng)節(jié)細(xì)胞處可見陽性的棕色顆粒狀染色，而在痙攣段未見明顯染色。
　　結(jié)論：神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因DPF3、Smarcd3及MEF2可能參與HD的發(fā)病過程。
　　第二節(jié)293T細(xì)胞內(nèi)分

5、化相關(guān)基因HA117對神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因的調(diào)控
　　目的：通過對感染HA117過表達(dá)慢病毒的293T細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因DPF3、Smarcd3及MEF2表達(dá)的檢測，探討HA117與神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因的關(guān)系。
　　方法：利用HA117過表達(dá)慢病毒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。利用Real-Time、免疫蛋白印跡法等技術(shù)，從RNA水平上檢測HA117在293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后的表達(dá)以及神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因 DPF3、Smarcd3和 MEF2在29

6、3T細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后RNA和蛋白水平的表達(dá)。其中，利用BIO-RAD對mRNA數(shù)據(jù)半定量分析；Genesnap系統(tǒng)及軟件對蛋白數(shù)據(jù)進(jìn)行分析；GraphPad Prism5繪圖，SPSS（version17.0）進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。
　　結(jié)果：HA117 RNA在293T、293T/Vector及293T/HA117內(nèi)的表達(dá)分別為0.020±0.003、0.027±0.031、1.116±0.372；DPF3 mRNA在293T、293T/V

7、ector及293T/HA117內(nèi)的表達(dá)分別為1.653±0.187、1.527±0.185、0.984±0.276；Smarcd3 mRNA在293T、293T/Vector及293T/HA117內(nèi)的表達(dá)分別為1.653±0.156、1.013±0.161、0.532±0.134；MEF2 mRNA在293T、293T/Vector及293T/HA117內(nèi)的表達(dá)分別為0.821±0.258、1.677±0.779、0.875±0.38

8、4.HA117轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后表達(dá)明顯增高（P<0.05）;DPF3、Smarcd3在293T細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)均較其在轉(zhuǎn)染HA117過表達(dá)慢病毒的293T細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)明顯降低（P<0.05）；MEF2 mRNA在293T/HA117細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)較293T/Vector內(nèi)的表達(dá)明顯降低（P<0.05），與293T細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)沒有明顯差別（P>0.05）。HA117與神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因在293T及293T/HA117細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)趨勢相反。