神經(jīng)降壓素受體1在先天性巨結(jié)腸癥腸壁肌間神經(jīng)叢的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:先天性巨結(jié)腸癥（HSCR）又稱“腸壁無神經(jīng)節(jié)細(xì)胞癥”，是由遺傳、環(huán)境等多種因素共同作用導(dǎo)致腸神經(jīng)系統(tǒng)(ENS)早期發(fā)生多基因突變或表達(dá)異常的神經(jīng)嵴細(xì)胞源性的一種先天性腸道疾病。其基本病理生理改變?yōu)檫h(yuǎn)端病變結(jié)腸黏膜下神經(jīng)叢（Submucosal plexuses）和肌間神經(jīng)叢（Myenteric plexuses）內(nèi)完全或部分缺乏腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(IGCS)，致使神經(jīng)纖維排列紊亂，呈波浪狀，造成結(jié)腸持續(xù)痙攣，失去正常的推進(jìn)蠕動(dòng)功能。由于

2、糞便通過困難，長期淤積于痙攣腸段，近端結(jié)腸代償性擴(kuò)張、增厚，形成巨結(jié)腸。ENS是一個(gè)復(fù)雜而積極的胃腸道動(dòng)力和感覺神經(jīng)系統(tǒng)，由腸道肌間和黏膜下神經(jīng)叢共同構(gòu)成，兩者之間緊密聯(lián)系，對胃腸道的運(yùn)動(dòng)、分泌功能具有獨(dú)立的調(diào)節(jié)作用。HSCR是ENS早期發(fā)生基因突變或功能喪失的結(jié)果。
　　神經(jīng)降壓素（NT）是由腸道具有特殊內(nèi)分泌功能的開放型的N細(xì)胞分泌的一種神經(jīng)遞質(zhì)或調(diào)質(zhì)，屬于配體依賴性的轉(zhuǎn)錄因子，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）以及心血管、呼吸、消化、

3、內(nèi)分泌、免疫等多種外周系統(tǒng)中存在并發(fā)揮重要的功能調(diào)節(jié)作用。神經(jīng)降壓素受體1（NTSR1）是一種具有7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域的G蛋白偶聯(lián)受體，在人體結(jié)腸中與NT配基親和力最高。NT通過介導(dǎo)G蛋白偶聯(lián)受體NTSR1激活相應(yīng)的信號(hào)通路，產(chǎn)生向下的信號(hào)傳遞，到達(dá)胃腸道平滑肌等效應(yīng)部位，從而增強(qiáng)結(jié)腸的推進(jìn)運(yùn)動(dòng)，使糞便排空。NTSR1在ENS中對腸道動(dòng)力具有十分重要的作用。
　　在前期研究中，利用基因芯片技術(shù)檢測出大量的HSCR差異性表達(dá)基因，其中NT

4、SR1基因表達(dá)明顯下調(diào)，并經(jīng)RT-PCR驗(yàn)證。查閱相關(guān)文獻(xiàn)，目前國內(nèi)外在NT-NTSR1的相互作用與HSCR發(fā)病的相關(guān)關(guān)系方面研究較少。有研究已發(fā)現(xiàn)，NTSR1在人體正常結(jié)腸組織黏膜下和肌間神經(jīng)叢存在不同程度的陽性表達(dá)，而NTSR1在HSCR各腸段是否表達(dá)并存在表達(dá)的異常尚不清楚。因此，本研究從前期研究結(jié)果中選取 NTSR1基因，采用免疫組織化學(xué)染色法觀察NTSR1在HSCR各段腸壁肌間神經(jīng)叢的表達(dá)情況，從而初步探討NTSR1與HSCR

5、發(fā)病的可能關(guān)系。
　　方法:選取2010年1月至2014年9月在廣東省婦幼保健院小兒外科經(jīng)肛門巨結(jié)腸根治術(shù)治療的HSCR患兒手術(shù)標(biāo)本42例作為實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組分為狹窄段、移行段、擴(kuò)張段、正常段四個(gè)組別。所有患兒均為首次接受手術(shù)治療，均為散發(fā)病例，無合并其他主要臟器的先天性畸形或綜合癥，近系親屬均無HSCR病例。所有患兒均根據(jù)術(shù)前臨床表現(xiàn)、鋇劑灌腸造影等檢查，以及術(shù)中快速冰凍病理及術(shù)后病理科醫(yī)師二次HE染色診斷結(jié)果綜合確診。所選取病例

6、符合正態(tài)分布的原則。選取與實(shí)驗(yàn)組年齡相近的如先天性無肛門、結(jié)腸穿孔、乙狀結(jié)腸冗長癥等非HSCR患兒手術(shù)切除的正常結(jié)腸標(biāo)本20例作為對照組，對照組家族中無HSCR病例及其它腸神經(jīng)發(fā)育異常性疾病。在光學(xué)顯微鏡下觀察實(shí)驗(yàn)組與對照組病例HE染色的結(jié)果并統(tǒng)計(jì)。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測42例實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本狹窄段、移行段、擴(kuò)張段、正常段及20例正常對照組標(biāo)本腸壁肌間神經(jīng)叢中NTSR1的表達(dá)，光鏡下觀察并統(tǒng)計(jì)其陽性表達(dá)情況，并與HE染色結(jié)果進(jìn)行對比。同時(shí)

7、應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析軟件(Image-Pro Plus6.0)計(jì)算NTSR1在實(shí)驗(yàn)組及對照組各段腸壁肌間神經(jīng)叢中免疫組化陽性染色的平均光密度（MOD）并將結(jié)果進(jìn)行定量分析，將所得數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理分析，判定差別是否存在意義。
　　結(jié)果:
　　1. HE染色：狹窄段肌間神經(jīng)叢中未見神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，神經(jīng)纖維較擴(kuò)張段明顯增粗、排列紊亂。從狹窄段到正常段腸壁肌間神經(jīng)叢中，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的分布逐漸增多，變性神經(jīng)纖維的分布逐漸

8、減少。
　　2.在HSCR實(shí)驗(yàn)組正常段及對照組肌間神經(jīng)叢中，可見NTSR1強(qiáng)陽性表達(dá)的神經(jīng)纖維；在擴(kuò)張段，強(qiáng)陽性表達(dá)的神經(jīng)纖維較實(shí)驗(yàn)組正常段和對照組有所減少；在移行段，可見散在弱陽性到中等強(qiáng)度陽性表達(dá)的神經(jīng)纖維；在狹窄段，可見少量弱陽性表達(dá)的神經(jīng)纖維，肌間神經(jīng)叢總體表達(dá)呈弱陽性或陰性。
　　3. NTSR1在HSCR各段腸壁平滑肌中呈弱陽性到中等強(qiáng)度陽性表達(dá)，其中環(huán)形肌的總體表達(dá)強(qiáng)度高于縱形肌。
　　4.定量分析：NT

9、SR1在HSCR實(shí)驗(yàn)組狹窄段、移行段、擴(kuò)張段、正常段及對照組肌間神經(jīng)叢中陽性表達(dá)的平均光密度分別為8.39±2.68、11.76±6.79、17.14±12.26、21.92±14.68、23.45±19.82，經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件分析，與移行段、擴(kuò)張段、正常段及對照組腸壁肌間神經(jīng)叢相比，狹窄段平均光密度明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；移行段與擴(kuò)張段、移行段與正常段、移行段與對照組、擴(kuò)張段與正常段、擴(kuò)張段與對照組、正常段與對照組各間的平均光密度相比，