兔ALI-ARDS的血凝狀態(tài)異常及肝素的抗凝治療作用.pdf

1、ALI/ARDS是由局部或全身的多種疾病引起的一種常見的危重病，其病理生理過程是肺內(nèi)炎癥細胞(如中性粒細胞、單核巨噬細胞)導致的全身炎癥反應，其主要特征為肺微血管通透性增高，肺間質(zhì)和肺泡滲出肺水腫、肺不張和透明膜形成，并伴有肺間質(zhì)纖維化。研究結(jié)果表明在疾病的早期產(chǎn)生的大量細胞因子可促進血小板和中性粒細胞的聚集、黏附，原有的凝血和抗凝、纖溶與抗纖溶、炎癥和抗炎之間的平衡被打破，凝血級聯(lián)和炎癥級聯(lián)之間相互促進，形成一種放大效應。通過調(diào)節(jié)凝血

2、和纖溶系統(tǒng)來減少肺內(nèi)纖維蛋白沉積，可能成為ALI/ARDS的一種重要治療方法。 目的：本實驗采用兔股靜脈注射LPS的方法，制造 ALI/ARDS模型，觀察兔不同時相點凝血、纖溶和炎癥因子的變化，應用抗凝藥物肝素糾正發(fā)生ALI/ARDS早期凝血與抗凝，炎癥與抗炎之間的失衡，以期達到減輕或防止ALI/ARDS發(fā)生和發(fā)展的過程，達到控制其病情發(fā)展的目的。本實驗的目的主要是研究 ALI/ARDS早期凝血和炎癥因子的變化相互之間的關(guān)系，以

3、及肝素對ALI/ARDS早期發(fā)展過程的調(diào)控機制。 方法： 1、試驗分組 實驗采用新西蘭大耳白兔36只，動物隨機分為3組：對照組(A組)、內(nèi)毒素組(B組)、內(nèi)毒素+肝素治療組(C組)，每組12只。A、B、C組動物均進行麻醉、固定、動靜脈插管，操作成功后B、C組動物經(jīng)股靜脈輸入大腸桿菌內(nèi)毒素(LPS)500ug/kg，控制時間在半小時左右，所有動物實驗過程中持續(xù)輸入乳酸鈉格林注射液8ml/kg/h。C組動物注射LPS

4、后1小時自靜脈輸入肝素50U/kg/h,持續(xù)5小時。實驗動物連用2天。各組均于4、8、12、24、48 h抽血進行相應指標的測量。 2、主要實驗方法 (1)用大腸桿菌內(nèi)毒素(LPS)制備大耳白兔急性肺損傷模型； (2)用Nova Stst Profile M血氣分析儀進行血氣分析； (3)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法測定血漿腫瘤壞死因子a(TNF-a)濃度； (4)采用免疫濁度法測

5、定血漿ATⅢ活性； (5)采用自動血細胞分析儀測定血小板； (6)48 h后處死動物，取右肺上葉計算肺干濕重比值(D/W)，右肺下葉觀察肺組織病理學改變； (7)對各組動物48 h死亡率進行比較。 3、統(tǒng)計方法 用SPSS統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)采用X±SD表示，采用重復測量數(shù)據(jù)的兩因素多水平方差分析。死亡率的比較采用卡方檢驗。P>0.05為統(tǒng)計學無差異顯著，P<0.05或P<0.01為統(tǒng)計學差

6、異顯著。 結(jié)果： 1、B、C組動物注射內(nèi)毒素后動脈血氧分壓(PaO<,2>)明顯下降，4h后B組、C組PaO<,2>均顯著低于A組(P<0.05)，此后B組PaO<,2>進行性下降，48 h時仍與對照組相差顯著(P<0.05)；而C組PaO<,2> 8 h時達到最低值后逐漸上升，24 h時C組PaO<,2>與對照組相差不顯著(p>0.05)，8、12、24、48h時C組PaO<,2>較B組明顯升高(p<0.05)。

7、 2、B、C組動物注射內(nèi)毒素后血漿TNF-a濃度均明顯升高，4h后B組、C組TNF-a均顯著高于A組(P<0.05)，并均于8 h達到最高峰；各組TNF-a隨后逐漸下降，但48 h時B組仍與對照組相差顯著(P<0.05)，而C組48 h時與對照組相差不顯著(p>0.05)，24、48 h時C組TNF-a較B組明顯降低(p<0.05)。 3、B、C組動物注射內(nèi)毒素后血漿ATⅢ活性均明顯降低，4h后B組、C組ATⅢ活性均顯著低于A

8、組(P<0.05)，且均為最低值；隨后各組ATⅢ活性逐漸升高，但48 h時B組仍較對照組明顯降低(P<0.05)，而C組24、48 h時與對照組相差不顯著(p>0.05)，12、24、48 h時C組ATⅢ活性較B組明顯增高(p<0.05)。 4、B、C組動物注射內(nèi)毒素后血小板均逐漸降低，8h后B組、C組血小板水平均顯著低于A組(P<0.05)，此后B組血小板進行性降低，48 h時B組仍與對照組相差顯著(P<0.05)，而C組24

9、、48 h時與對照組相差不顯著(p>0.05)，24h、48 h時C組血小板水平較B組明顯增高(p<0.05)。 5、對B組動物4、8、12、24 h TNF-a與ATⅢ活性相關(guān)性進行分析發(fā)現(xiàn)，TNF-a與ATⅢ活性之間的變化存在顯著相關(guān)性(r=-0.798，r=-0.895，r=-0.854，r=-0.813。P<0.01)。 6、A組、B組、C組的肺D/W分別為：0.2869±0.021，0.2173±0.015，0

10、.2486±0.018。B組、C組的肺D/W明顯較A組降低(P<0.05)；C組的肺D/W與B組相比則升高(P<0.05)。 7、各組肺損傷評分：A組肺損傷評分為6分。B組肺損傷評分為18.33±3.47分，可見肺泡壁增厚、炎性細胞浸潤、局灶出血、血栓形成、肺泡萎陷、肺泡腔內(nèi)可見水腫液。C組肺損傷評分為12.6±2.41，與B組相比有顯著性差異(P<0.05)，組織切片示肺組織病理改變較B組明顯減輕，可見輕度肺水腫，少見出血，肺

11、間質(zhì)充血、水腫明顯減輕。 8、實驗過程中A組沒有動物死亡，B組有4只動物死亡，C組有1只動物死亡，經(jīng)卡方檢驗，C組動物死亡率較B組低(p<0.05)。 結(jié)論： 1、ALI/ARDS早期血漿TNF-a明顯升高，且與動物的病情輕重相關(guān)，提示炎癥反應失控參與了 ALI/ARDS早期的組織損傷并發(fā)揮重要作用。 2、ALI/ARDS早期血漿ATⅢ活性和血小板計數(shù)明顯降低，且與動物的病情輕重相關(guān)，提示凝血機制異常在A