WGA、RCA-I和ECL凝集素受體在過(guò)量維甲酸致昆明小鼠腭裂發(fā)生中的作用.pdf

1、目的：腭裂是發(fā)病率較高的一種先天性頜面部發(fā)育缺陷，一般認(rèn)為，它的病因?yàn)榛蚝铜h(huán)境因素的聯(lián)合作用。腭的形成是一個(gè)極其復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程，受到諸多基因及調(diào)節(jié)因子的的嚴(yán)密調(diào)控，其中任何調(diào)節(jié)因子及相關(guān)基因的表達(dá)異常，都可能導(dǎo)致腭裂的發(fā)生。凝集素受體即是這些調(diào)節(jié)因子中的一員。
　　 凝集素受體是一類分布于細(xì)胞膜表面的糖蛋白、糖脂等糖復(fù)合物。凝集素受體上具有能被凝集素特異識(shí)別并結(jié)合的糖基。它們?cè)诩?xì)胞的生長(zhǎng)、分化、細(xì)胞之間的黏附及相互識(shí)別中起重

2、要作用。維甲酸(RA)是維生素A在體內(nèi)的自然活性代謝物，也是胚胎發(fā)育過(guò)程中不可缺少的形態(tài)發(fā)生素。在小鼠腭組織發(fā)育敏感期，RA可誘發(fā)子代發(fā)生腭裂。本研究以昆明小鼠為研究對(duì)象，在RA致小鼠腭裂畸形動(dòng)物模型上，利用親和細(xì)胞化學(xué)法探討麥胚凝集素(wheat germagglutinin，WGA)、蓖麻凝集素(ricinus communis agglutinin，RCA-I)和雞冠珊瑚樹(shù)凝集素(erythrina cristagalii lec

3、tin，ECL)三種受體在RA致胚胎腭裂畸形發(fā)生中的表達(dá)狀況和變化規(guī)律，以期闡明上述三種凝集素受體在過(guò)量RA致腭裂的發(fā)生機(jī)制，為腭裂的預(yù)防與治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：⑴RA致昆明小鼠腭裂畸形動(dòng)物模型的建立：下午六時(shí)，昆明小鼠雌雄2:1合籠，次日早上陰栓陽(yáng)性雌鼠定為孕0天(gestation day0，GDO)。孕鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組于GD10，一次性灌服RA芝麻油懸浮液，劑量為80mg/kg，對(duì)照組于相同時(shí)間一

4、次性灌服等量芝麻油。⑵麥胚凝集素(WGA)受體、蓖麻凝集素(RCA-I)受體及雞冠珊瑚樹(shù)凝集素(ECL)受體的檢測(cè):實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組孕鼠各隨機(jī)分為8小組，分別于GD138、GD1314、GD1322、GD148、GD1414、GD1422、GD158和GD1522等8個(gè)時(shí)間點(diǎn)剖宮取胚，常規(guī)石蠟切片。采用親和細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)WGA受體、RCA-I受體和ECL受體在各組不同時(shí)點(diǎn)腭板上皮和間充質(zhì)中的表達(dá)和分布狀況。
　　 結(jié)果：①WGA受

5、體親和組織化學(xué)染色結(jié)果：在正常對(duì)照和實(shí)驗(yàn)各組的腭板上皮及其間充質(zhì)中WGA均有不同程度的表達(dá)。圖象分析結(jié)果顯示，伴隨胚胎發(fā)育，WGA在對(duì)照組腭板上皮中的表達(dá)量呈現(xiàn)先逐漸上升(GD138～GD1322)，而后逐漸下降(GD1322～GD1522)的趨勢(shì)。其峰值出現(xiàn)于GD1322時(shí)。在實(shí)驗(yàn)組，其表達(dá)量則呈逐漸下降的趨勢(shì)。除GD138時(shí)明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，GD1314和GD1522時(shí)與對(duì)照組無(wú)顯著性差異外，其余各時(shí)間點(diǎn)均明顯低于相應(yīng)

6、對(duì)照組(P＜0.05，P＜0.01)。無(wú)論在對(duì)照組還是在實(shí)驗(yàn)組，WGA在間充質(zhì)中的表達(dá)量均明顯低于在腭板上皮中的表達(dá)量。無(wú)論在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，WGA在間充質(zhì)中的表達(dá)量均呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)，在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的表達(dá)量之間均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。②RCA-I受體親和組織化學(xué)染色結(jié)果：在正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組腭板上皮和間充質(zhì)中，RCA-I也均有不同程度的表達(dá)。圖象分析結(jié)果顯示，伴隨胚胎發(fā)育，RCA-I在對(duì)照組腭板上皮中的表達(dá)量

7、呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，其峰值出現(xiàn)于GD158時(shí)。在實(shí)驗(yàn)組，伴隨胚胎發(fā)育，RCA-I表達(dá)量的波動(dòng)較大，但其總趨勢(shì)與對(duì)照組大體相仿。除GD138和GD1414外，實(shí)驗(yàn)組腭板上皮中RCA-I的表達(dá)量均顯著低于相應(yīng)對(duì)照組(P＜0.05，P＜0.01)。在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，RCA-I在間充質(zhì)中的表達(dá)量均明顯低于在腭板上皮中的表達(dá)量；而且均呈現(xiàn)先下降而后逐漸上升的趨勢(shì)，但在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。③ECL受體親和

8、組織化學(xué)染色結(jié)果：在正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組腭板上皮和間充質(zhì)中，ECL均有不同程度的表達(dá)。圖象分析結(jié)果顯示，伴隨胚胎發(fā)育，ECL在對(duì)照組腭板上皮中的表達(dá)量呈現(xiàn)先逐漸上升(GD138～GD1322)，而后逐漸下降(GD1322～GD1414)，最后又大幅上升(GD1414～GD1522)的趨勢(shì)。在實(shí)驗(yàn)組腭板上皮，其變化趨勢(shì)與對(duì)照組大體相仿，在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，其表達(dá)量均顯著低于相應(yīng)對(duì)照組(P＜0.05，P＜0.01)。在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組ECL在間充質(zhì)中