郁金提取物對山葵墨入病菌的抑菌活性研究.pdf

1、山葵墨入菌病隨著20世紀(jì)90年代后期山葵的引種而傳入我國，該病作為傳入我國大陸的新病害，目前藥劑防治效果不明顯，而且造成了一定程度的環(huán)境污染。應(yīng)用植物源抑菌劑對植物病害進行生物防治是比較理想的方法。因此，本文擬從中藥中篩選出對山葵墨入菌具有抑菌活性的物質(zhì)，并對其進行活性和成分的初步研究。 對中藥黃芩、射干、百部、郁金進行清水、95％乙醇提取并濃縮得到浸膏，以山葵墨入菌作為指示菌，應(yīng)用生長速率法測定抑菌活性。初步研究表明，郁金的9

2、5％乙醇熱攪拌提取率為4.42％，其浸膏對山葵墨入菌具有一定的抑菌活性，藥基濃度為1.0 mg/ml時，抑菌率為67.08％。為了進一步研究郁金95％乙醇提取物的抑菌活性，對郁金醇提浸膏進行正己烷、乙酸乙酯、甲醇的分步萃取，并對其進行抑菌活性分析。結(jié)果表明，抑菌的活性成分主要存在于郁金正己烷萃取物中，藥基濃度為1.0 mg/ml時，對山葵墨入菌的抑菌率為79.70％，而乙酸乙酯和甲醇的萃取物抑菌活性較低。郁金正己烷萃取物以山葵墨入菌為指

3、示菌，毒力回歸方程為：Y=1.5427x+5.7430，EC<,50>為0.3299 mg/ml，在藥液濃度為10 mg/ml時，對孢子萌發(fā)抑制率為97.2％。 郁金95％乙醇提取物和各萃取物經(jīng)乙醇一濃硫酸顯色后，結(jié)果表明，郁金中的主要成分姜黃素存在于乙酸乙酯萃取物中，結(jié)合抑菌活性實驗確定姜黃素對山葵墨入菌的抑菌活性較低，乙酸乙酯萃取物藥基濃度為1.0 mg/ml時，抑菌率僅為37.09％。采用GC-MS技術(shù)對郁金正己烷萃取物進

4、行系統(tǒng)分析后，選擇鑒定出其中含量較高的40種化合物，其中含量最高的為土青木香烯(23.91％)，其次是1，2-去氫睪酮(23.63％)，還含有一些揮發(fā)油類的化合物、長鏈脂肪酸、長鏈脂肪酸酯、生物堿等。在抑菌譜的測定中，選用具有代表性的7種病原菌：小麥赤霉菌、油菜菌核菌、輪枝孢子菌、疣孢霉、橄欖綠霉、蒼白青霉、番茄灰霉病菌等作為供試菌，用菌絲生長速率法測定郁金95％乙醇浸膏正己烷萃取物對多種病原真菌的抑制作用，并測定了最低抑菌濃度(MIC

5、)和最低殺菌濃度(MBC)。結(jié)果表明，郁金正己烷萃取物對多種病原真菌均具有抑菌活性，藥基濃度為1.0mg/ml時，對番茄灰霉病菌的抑菌率達到100％，對油菜菌核菌的抑菌率為86.58％，對疣孢霉的抑菌率為71.72％，對輪枝孢子菌的抑菌率為78.19％，對小麥赤霉菌的抑菌率為76.82％，對蒼白青霉的抑菌率為74.85％，對橄欖綠霉的抑菌率為54.78％。郁金正己烷萃取物對灰霉的MIC和MBC值相同均為1.56 mg/ml；油菜菌核菌和

6、蒼白青霉MIC和MBC均為3.13 mg/ml；山葵墨入菌、小麥赤霉菌、疣孢霉、輪枝孢子菌的MIC值為6.25 mg/ml，而對橄欖綠霉的MIC值為12.5 mg/ml。 以山葵墨入菌、油菜菌核菌、疣孢霉作為指示菌，研究各種物理、化學(xué)條件下郁金正己烷萃取物的穩(wěn)定性及對抑菌能力的影響，并在透射電鏡下觀察正己烷萃取物作用前后山葵墨入菌和油菜菌核菌超微結(jié)構(gòu)的改變。結(jié)果表明：郁金正己烷萃取物處理溫度在60℃以上，pH>6.0時，抑菌率有