京海黃雞ZP2基因啟動子區(qū)甲基化對基因表達及產(chǎn)蛋數(shù)的影響分析.pdf

1、京海黃雞擁有小型、優(yōu)質(zhì)、早熟、抗逆性強四大特點。從生產(chǎn)記錄中發(fā)現(xiàn)其群體中存在300日齡產(chǎn)蛋數(shù)高和低的特殊個體。產(chǎn)蛋數(shù)作為數(shù)量性狀，其不僅易受環(huán)境的影響，同時受到微效多基因的控制。本文著眼于這兩點，選擇了可能對京海黃雞產(chǎn)蛋數(shù)具有影響的4個基因（ZP2基因、Stat5b基因、AMH基因、MDH1基因），采用qRT-PCR的方法研究了四個基因在300日齡京海黃雞個體組織里的表達規(guī)律，重點剖析了卵巢組織里的表達狀況，并通過雙熒光素酶基因報告系統(tǒng)

2、對ZP2基因核心啟動子區(qū)域進行了研究，本文還采用BSP(Bisulfite Sequencing PCR)測序的方法，對卵巢組織中ZP2基因啟動子區(qū)CpG島的甲基化進行了定量檢測，同時分析了重要甲基化位點對基因mRNA表達量的調(diào)控作用，結(jié)合啟動子區(qū)潛在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的預(yù)測，分析甲基化位點所在區(qū)域，進一步探討ZP2基因的分子調(diào)控機制。主要實驗結(jié)果如下:
　　1.通過實時熒光定量檢測4個基因在300日齡京海黃雞9個組織中的mRNA

3、的表達量發(fā)現(xiàn)，ZP2基因在卵巢中的表達豐度最高，其次是腎臟;Stat5b基因在腿肌中的表達豐度最高，其次是胸肌，在卵巢中的表達量較低;AMH基因在卵巢中的表達豐度最高，其它組織中的表達量較低;MDH1基因在心臟中的表達豐度最高，其次是腿肌，在卵巢中表達量較低。ZP2基因在高產(chǎn)組中的表達量極顯著高于低產(chǎn)組(P＜0.01)，Stat5b基因和AMH基因在高產(chǎn)組的表達量低于低產(chǎn)組，但沒有明顯差異，MDH1基因在兩組間的表達量幾乎相同。以上結(jié)果

4、說明，ZP2基因表達上調(diào)對京海黃雞的產(chǎn)蛋數(shù)有一定影響，Stat5b基因和MDH1基因?qū)┖｜S雞的產(chǎn)蛋數(shù)可能沒有直接影響，AMH基因在卵巢中具有較高的表達量，但高低產(chǎn)組的表達差異不顯著，其在京海黃雞卵巢中發(fā)揮的作用還需進一步研究。
　　2.京海黃雞ZP2基因啟動子系列缺失片段在DF-1細胞中具有不同的啟動子活性，重組質(zhì)粒pGL3-P6的活性最高，pGL3-P5的活性明顯下降，說明ZP2基因啟動子的核心區(qū)域在-1552～-1348之間

5、，與Neural Network PromoterPredietion在線網(wǎng)站預(yù)測的結(jié)果一致。
　　3.通過軟件預(yù)測發(fā)現(xiàn)ZP2基因啟動子區(qū)共有4個CpG島，利用BSP技術(shù)檢測啟動子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)。ZP2-1擴增片段總體甲基化程度與mRNA表達量有一定程度的負相關(guān)(R=-0.197，P=0.672)，所有單個位點的甲基化程度與mRNA表達量的相關(guān)性都沒有達到顯著水平;ZP2-2擴增片段總體的甲基化程度與mRNA的表達量也有一